申请/专利权人：北京金王健康科技有限公司

申请日：2023-11-13

公开（公告）日：2024-06-07

公开（公告）号：CN117482209B

主分类号：A61K38/08

分类号：A61K38/08;A61P9/12;A23L33/18;C07K7/06;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;C12P21/06

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.07#授权;2024.02.23#实质审查的生效;2024.02.02#公开

摘要：本发明公开了一种具有ACE抑制作用的蜂王胎活性肽组合物及其制备方法和应用，属于食品医药技术领域。本发明提供的蜂王胎活性肽组合物包括5种小分子肽中的至少一种；所述5种小分子肽的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5所示。本发明制备的ACE抑制肽组合物活性高，产量大，可操作性强，能进行产业化生产，为从蜂王胎中制备高活性的ACE抑制肽提供了实验依据。

主权项：1.一种具有ACE抑制作用的蜂王胎活性肽组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1预处理：将蜂王胎与水混合，打浆后得到预制液A；2碱溶：将所述预制液A与水混合进行稀释，调节pH值至7.0～9.0，搅拌，离心取上清液，得到预制液B；3酶解：将所述预制液B与蛋白酶混合进行酶解，灭活后离心取上清液，得到预制液C；4纯化：将所述预制液C依次经凝胶过滤层析、阴离子交换层析、反相高效液相色谱纯化，得到所述具有ACE抑制作用的蜂王胎活性肽组合物；所述蜂王胎活性肽组合物包括5种小分子肽；所述5种小分子肽的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5所示；步骤（3）中，所述蛋白酶为食用中性蛋白酶；所述蛋白酶的添加量为6000～9000Ug蛋白质；所述酶解的温度为40～50℃；所述酶解的时间为2～4h；步骤4中，所述凝胶过滤层析的条件为：SephadexG-25柱层析分离，用水洗脱，流速0.4～0.6mLmin，在250～300nm下检测吸光度收集洗脱组分，收集具有最高ACE抑制率的组分，冷冻干燥；步骤4中，所述阴离子交换层析的条件为：采用HiTrapDEAE-FF阴离子交换纯化；流动相A液为0.01～0.02molL、pH6～8的磷酸盐缓冲液；流动相B液为含1.0～2.0molLNaCl的0.01～0.02molL、pH6～8磷酸盐缓冲液；上样液为凝胶过滤层析中所得的成分；洗脱条件为100％A液洗脱15～25min，然后在55～65min内逐步改变至100％B，最后用100％B液洗脱15～25min，洗脱流速为0.5～1.5mLmin；在250～300nm下检测吸光度收集洗脱组分，收集具有最高ACE抑制率的组分，冷冻干燥；步骤4中，所述反相高效液相色谱纯化的条件为：采用C18柱；流动相A为含0.1～0.2vt％三氟乙酸的超纯水；流动相B为含0.1～0.2vt％三氟乙酸的乙腈；流速为2～4mLmin；上样液为阴离子交换层析中所得的成分；梯度洗脱程序为：0～5min：100％B，5～25min：50％A，50％B，25～40min：100％A；在250～300nm下检测吸光度收集洗脱组分，收集具有最高ACE抑制率的组分，冷冻干燥。

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