申请/专利权人：中国农业科学院作物科学研究所

申请日：2023-05-22

公开（公告）日：2024-06-14

公开（公告）号：CN116445463B

主分类号：C12N9/78

分类号：C12N9/78;C12N9/22;C12N9/24;C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.14#授权;2023.08.04#实质审查的生效;2023.07.18#公开

摘要：本发明公开了新型植物碱基编辑器pAYBEs。本发明通过将腺嘌呤碱基编辑器与hMPG融合，在植物中建立了第一代A‑to‑Y单碱基编辑系统pAYBEv1，进一步通过将hMPG替换为mhMPG建立了第二代A‑to‑Y单碱基编辑系统pAYBEv2，在此基础上，又通过将反式激活因子Vp64分别融合在pAYBEv1和pAYBEv2中的TadA8e‑nCas9D10A的N端，建立了第三代单碱基编辑系统pAYBEv3和第四代单碱基编辑系统pAYBEv4。本发明构建的植物AYBE单碱基编辑系统不仅丰富了植物单碱基编辑工具箱，也为水稻和其它农作物重要基因功能分析和遗传改良提供重要技术支撑。

主权项：1.成套系统在如下S1）-S9）任一种中的应用：S1）植物基因组序列的编辑；S2）制备植物基因组序列的编辑的产品；S3）提高植物基因组序列的编辑效率；S4）制备提高植物基因组序列的编辑效率的产品；S5）拓展植物基因组序列的编辑窗口；S6）制备拓展植物基因组序列的编辑窗口的产品；S7）制备植物突变体；S8）植物育种；S9）制备植物育种的产品；所述成套系统为如下M1）-M2）中任一种：M1）所述成套系统包括依次由核定位信号、反式激活因子Vp64、腺嘌呤脱氨酶TadA8e、Cas9D10A缺刻酶、人源烷基腺嘌呤DNA糖基化酶hMPG和核定位信号融合而成的融合蛋白、gRNA和筛选剂抗性蛋白；M2）所述成套系统包括依次由核定位信号、反式激活因子Vp64、腺嘌呤脱氨酶TadA8e、Cas9D10A缺刻酶、人源烷基腺嘌呤DNA糖基化酶七突突变体mhMPG和核定位信号融合而成的融合蛋白、gRNA和筛选剂抗性蛋白；所述人源烷基腺嘌呤DNA糖基化酶七突突变体mhMPG为将所述人源烷基腺嘌呤DNA糖基化酶hMPG氨基酸序列的第163位由甘氨酸突变为精氨酸，且将第169位由天冬酰胺突变为丝氨酸，且将第198位由丝氨酸突变为丙氨酸，且将第202位由赖氨酸突变为丙氨酸，且将第203位由甘氨酸突变为丙氨酸，且将第206位由丝氨酸突变为丙氨酸，且将第210位由赖氨酸突变为丙氨酸后得到的蛋白质；所述腺嘌呤脱氨酶TadA8e为氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；所述Cas9D10A缺刻酶为氨基酸序列是序列3所示的蛋白质；所述人源烷基腺嘌呤DNA糖基化酶hMPG为氨基酸序列是序列6所示的蛋白质；所述反式激活因子Vp64为氨基酸序列是序列9所示的蛋白质；所述核定位信号为氨基酸序列是序列10所示的蛋白质；所述植物为水稻。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业科学院作物科学研究所 新型植物碱基编辑器pAYBEs

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