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申请/专利权人：杭州多禧生物科技有限公司

摘要：本发明涉及通过连接IgG抗体或类抗体中某些重轻链间的半胱氨酸位点的制备均一的抗体偶联物的方法。本发明还涉及以特定方式制备偶联物的方法，包括生成抗体或类抗体蛋白试剂的特异性巯基，然后与药物连接子复合物反应，或生成抗体或类抗体蛋白质试剂的特异性巯基，同时在一锅中与合成制备的连接子‑药物组装体反应，以提供具有在IgG抗体或类抗体蛋白的重轻链之间的特定半胱氨酸位点连接的超过75％、在大多数情况下超过80％的有效载荷的偶联物。它还涉及均一偶联物在靶向预防或治疗癌症、感染和免疫疾病的方法。

主权项：1.均一偶联的过程包括以下步骤：a在包含有效量的锌-氨基螯合物复合物ZnNR1R2R3m1m2+和还原剂的缓冲体系中孵育抗体或类抗体蛋白，选择性地还原抗体或类抗体蛋白的链间二硫键，产生巯基；b加入有效量的带有巯基反应基团的连接子或药物连接子复合物，与步骤a产生的巯基反应；c任选地加入有效量的氧化剂例如，脱氢抗坏血酸以重新氧化未反应的巯基；或加入淬灭剂以封端未反应的巯基；和d纯化所得偶联物；e可替换任选步骤c为以下步骤：加入有效量的胱氨酸或二硫化物，或叠氮化化合物，以淬灭未反应的还原剂，同时胱氨酸或二硫化物被还原，产生半胱氨酸，以淬灭含有巯基反应性基团的过量的连接子或药物连接子复合物，或可加入有效量的半胱氨酸或相关巯基化合物，以淬灭过量的连接子或连接子有效载荷复合物分子；其中R1、R2和R3独立地选自C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、烷基环烷基、或杂环烷基；C3-C8的芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基或杂芳基；m1是1、2、3、4、5、6、7或8；或N、R1、R2和或R3本身可以形成杂环、碳环、二杂环或二碳环；且ZnNR1R2R3m1可以形成二聚体、三聚体、四聚体、五聚体或六聚体，这些聚合物通过N、R1、R2和或R3共价连接；其中还原剂是有机膦，用量为1.0-20蛋白质摩尔当量；其中步骤c中的氧化剂是DHAA、Fe3+、I2、Cu2+、Mn3+、MnO2、或Fe3+I-的混合物，步骤c中使用的氧化剂浓度为0.02mM–1.0mM，或1-100的蛋白质摩尔当量；步骤a中使用的锌-氨基螯合物络合物ZnNR1R2R3m1m2+的浓度为0.01mM-1.0mM，或0.5-20蛋白质摩尔当量；其中步骤b偶联反应的pH在约5.0至8.0之间；其中步骤a的反应溶液包含最多30％可与水混合混溶的有机溶剂，选自DMA、DMF、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、异丙醇、二恶烷、丙二醇或乙二醇，作为共溶剂加入水基缓冲溶液中；其中步骤b中偶联反应的温度在约-5℃至40℃之间；反应时间在约15分钟至约48小时之间；其中所得偶联物通过SephadexG25或SephacrylS300柱凝胶过滤、吸附色谱、离子阳离子或阴离子交换色谱或透析超滤或超过滤UF和或渗滤DF来纯化；其中偶联物的药物类抗体蛋白抗体比率DAR通过在波长范围240-380nm的UV、疏水相互作用色谱HIC-HPLC、毛细管电泳CE、LC-MS、CE-MS或LC-MSMS来测量。

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