申请/专利权人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所

申请日：2023-11-01

公开（公告）日：2024-06-18

公开（公告）号：CN117223609B

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.18#授权;2024.01.02#实质审查的生效;2023.12.15#公开

摘要：本发明公开了一种缩短木薯再生植株周期的方法，包括以下步骤：无菌苗的获得、FEC的诱导、FEC扩繁、FEC诱导植株再生；本发明采用自来水流速400‑500mLmin对木薯嫩茎组织进行冲洗，优选为500mLmin，500mLmin的自流水流速不仅可以快速冲洗木薯嫩茎表皮污染物，还可以保证在冲洗过程不会对嫩茎造成损伤。经过将体胚转移至MS培养基中培养，能加快至少17‑23天诱导长出大量优质球形胚和鱼雷胚；本发明创新地控制体胚在MS培养基中培养5‑8天可以加快体胚的形成。

主权项：1.一种缩短木薯再生植株周期的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1无菌苗的获得S1-1取田间种植的SC8或ZMI93木薯嫩茎，除去叶片，把嫩茎组织用网袋装好放在烧杯中用自来水流水冲洗2-4h；S1-2在超净工作台中，用10％次氯酸钠浸泡5-10min，再用灭菌蒸馏水清洗3次除去次氯酸钠；S1-3用灭菌的吸水纸吸干嫩茎表面的水份，根据芽眼位置切成小段，即芽眼上端尽量去除，但不伤到芽眼，下端留有1-1.5cm插到MS培养基中，12h，28℃光照培养，扩繁40-50天，得到无菌苗，备用；步骤S2FEC的诱导S2-1将无菌苗带侧芽的茎段切下1-2cm，将切下的茎段横放于CAM培养基中，28℃黑暗培养3-5天，诱导腋芽膨大；S2-2显微镜下观察侧芽膨大情况，用注射器针头将所有膨大的腋芽用1mL注射器的针头挑出，放置于CIM培养基中28℃黑暗培养18-20天；S2-3挑取腋芽上诱导形成的膨大的体胚，去除粘性的非胚性愈伤组织，将体胚转移至MS培养基中28℃黑暗培养5-8天，长出球形胚和鱼雷胚；S2-4挑出优质的体胚，分成小簇后集中放置于GD培养基中，28℃黑暗培养18-21天，期间每个隔18-21天换1-2次GD培养基，诱导其产生脆性愈伤组织，即脆性胚性愈伤FEC；步骤S3FEC扩繁S3-1挑选形态为球形胚或鱼雷胚的FEC至新的GD培养基中，分成小簇集中放置，置于28℃黑暗培养21天；S3-2根据需要可以扩繁8-10代，将生长状态好的FEC挑取到新的GD培养基，丢弃非胚性愈伤及生长状态不好的愈伤，循环培养2-3次后的FEC即可用于后续木薯转基因实验；步骤S4FEC诱导植株再生将纯化过的FEC放置到CEM培养基中，置于28℃12h光照培养7-15天后，长出子叶，叶片形成变绿，植株开始正常生长；步骤S1-1中，所述自来水水流呈线性流下，流速为400-500mLmin；步骤S2-1中，所述CAM培养基含有MS+10mgL6-BA；所述GD培养基含有NH4NO31.0gL、H3BO30.3mgL、CaNO32241.2mgL、CuSO40.025mgL、CoCl20.025mgL、MnSO41.0mgL、Na2EDTA37.25mgL、KCl65mgL、FeSO428.85mgL、KI0.8mgL、MgSO417.099gL、KNO31.0gL、Na2MoO40.025mgL、ZnSO40.3mgL、KH2PO40.3gL、生物素0.2mgL、甘氨酸4.0mgL、肌醇0.01gL、烟酸0.1mgL、维生素B60.1mgL、维生素B11.0mgL；所述MS培养基配方含有大量元素：NH4NO31650mgL、KNO31900mgL、CaCl2·2H2O440mgL、MgSO4·7H2O370mgL、KH2PO4700mgL；微量元素：KI0.83mgL、H3BO36.2mgL、MnSO4·4H2O22.3mgL、ZnSO4·7H2O8.6mgL、Na2MnO4·2H2O0.25mgL、CuSO4·5H2O0.025mgL、CoCl2·6H2O0.025mgL、FeSO4·7H2O27.8mgL、Na2-EDTA·2H2O37.3mgL；有机成分：肌醇100mgL、烟酸0.5mgL、盐酸吡哆醇维生素B60.5mgL、盐酸硫胺素维生素B10.5mgL、甘氨酸2mgL。

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百度查询： 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种缩短木薯再生植株周期的方法

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