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【发明授权】t-PA纯化方法_佛山汉腾生物科技有限公司;广州汉腾生物科技有限公司;佛山普津生物技术有限公司_202111574380.6 

申请/专利权人:佛山汉腾生物科技有限公司;广州汉腾生物科技有限公司;佛山普津生物技术有限公司

申请日:2021-12-21

公开(公告)日:2024-06-18

公开(公告)号:CN114426962B

主分类号:C12N9/64

分类号:C12N9/64

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2024.06.18#授权;2022.05.20#实质审查的生效;2022.05.03#公开

摘要:本发明涉及一种t‑PA纯化方法。该t‑PA纯化方法包括步骤:获得含有t‑PA与t‑PA抑制剂形成的非共价复合物的上样液;及将上样液进行赖氨酸亲和层析,制得纯化的t‑PA。该t‑PA纯化方法,通过将t‑PA与t‑PA抑制剂形成的非共价复合物,和赖氨酸亲和层析的结合使用,能够实现t‑PA的一步层析纯化,并且得到纯度高的t‑PA。一步纯化有利于提高纯化的回收率,以及便于工业化生产,降低生产成本。

主权项:1.一种t-PA纯化方法,其特征在于,由以下步骤组成:获得含有t-PA与t-PA抑制剂形成的非共价复合物的上样液;及将所述上样液进行赖氨酸亲和层析,制得纯化的t-PA;所述t-PA的氨基酸序列为SEQIDNO:1;所述t-PA抑制剂的氨基酸序列为SEQIDNO:2;制备所述非共价复合物的步骤包括:构建共表达t-PA和t-PA抑制剂的表达载体;及将所述表达载体转染至宿主细胞中表达,制备所述非共价复合物;所述上样液进行赖氨酸亲和层析的步骤包括:上样:采用平衡液平衡赖氨酸亲和层析柱后上样;淋洗:上样结束后,采用淋洗液淋洗赖氨酸亲和层析柱;洗脱:在淋洗结束后,采用洗脱液洗脱赖氨酸亲和层析柱,收集洗脱流出液;所述平衡液包括pH为7.5的50mmolL的NaH2PO4和0.01%wv的Tween-80;所述淋洗液包括pH为7.5的1molL的NaCl、50mmolL的NaH2PO4和0.01%wv的Tween-80;所述洗脱液包括pH为7.5的0.5molL的具有赖氨酸结合位点的物质、50mmolL的NaH2PO4和0.01%wv的Tween-80,所述具有赖氨酸结合位点的物质选自精氨酸、赖氨酸和ε-氨基己酸中至少一种。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 佛山汉腾生物科技有限公司;广州汉腾生物科技有限公司;佛山普津生物技术有限公司 t-PA纯化方法

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