申请/专利权人：云南林业职业技术学院;云南植虫药生物科技有限公司

申请日：2024-05-22

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN118216432A

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.21#公开

摘要：本发明涉及生物技术及植保技术领域，特别是大丽花高温脱毒快繁方法及应用，步骤包括：无菌体系建立、高温快速脱毒培养、茎尖脱毒、检测和扩繁。本发明无菌苗的丛生芽接种于高温快速脱毒培养基中，同时加以35±2℃的高温培养，能最大程度的促进大丽花的细胞分裂，使顶芽能快速生长，使得大丽花细胞的分裂速度快于病毒的侵染速度，从而有效降低顶端带毒率；通过采用高温快速脱毒培养，再结合茎尖脱毒培养，可使脱毒率提高至64%；采用无菌苗的茎尖，一方面可减少消毒剂对茎尖的影响，从而使茎尖获得完整植株的比例提高46%，且操作重现性强，其诱导丛生芽的比例较以0.4～2.0mm的茎尖至少可以提高20%。

主权项：1.大丽花高温脱毒快繁方法，其特征在于，步骤包括：（1）无菌体系建立：采用顶芽为外植体，经消毒后，接种于MS+NAA0.02～0.05mgL+6-BA1.0～1.5mgL的培养基中，置于光照10～12h、光强2500～3000lx、温度25±2℃下培养20～30天；（2）高温快速脱毒培养：将无菌体系建立时诱导的丛生芽，接种于MS+NAA0.02～0.05mgL+ZT2.0～3.0mgL+GA31.0～1.5mgL的高温快速脱毒培养基中，置于光照12～14h、光强2500～3000lx、温度35±2℃下进行高温快速培养10～15天；（3）茎尖脱毒：步骤（2）所得高温快速脱毒培养的芽，切下顶端0.5～0.8cm顶芽，接种于MS+NAA0.1～0.2mgL+BR0.01～0.02mgL+GA30.2～0.3mgL+椰汁30～50mlL的茎尖脱毒培养基中，置于光照10～12h、光强2500～3000lx、温度25±2℃下培养40～50天；（4）检测：采用黄瓜花叶病毒（CMV）、番茄斑病毒（TSWV）以及大丽花花叶病毒（DaMV）三种病毒兔抗血清的免疫球蛋白进行检测；（5）扩繁：将步骤（4）检测结果为阴性的大丽花丛生芽切成单芽，接种于MS+NAA0.02～0.05mgL+6-BA1.0～1.5mgL的增殖培养基中，置于光照10～12h、光强2500～3000lx、温度25±2℃下培养20～30天。

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权利要求：

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