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申请/专利权人：云南省畜牧兽医科学院
申请日：2024-05-22
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222491A
主分类号：C12N5/075
分类号：C12N5/075;C12N5/073;G01N21/64
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明涉及一种提高少量冷冻未成熟卵母细胞体外发育能力的方法，目的在于提供一种可以区分特殊个体与普通个体的早期胚胎体外共培养体系，解决少量冷冻未成熟卵母细胞体外成熟及后续早期胚胎发育效果不理想的问题。本发明将CFDASE染料应用于区分体外共培养中不同来源的卵母细胞及早期胚胎。采用本发明的技术方案，可实现提升特定猪个体少量未成熟卵母细胞冷冻后发育潜力，这对于建立地方猪或基因编辑猪的“卵子库”及提高其利用率具有重要意义。
主权项：1.一种提高冷冻未成熟卵母细胞体外发育能力的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将新鲜未成熟卵母细胞进行荧光标记，所述荧光标记染料为56-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯；S2、将冷冻未成熟卵母细胞解冻后，与S1获得的荧光标记新鲜未成熟卵母细胞以40~60枚为一组，每组放入24孔板的一个孔中，每孔内事先添加有0.5mL体积的体外成熟液，共培养42～44h，获得体外成熟卵母细胞，所述每个孔所容纳的冷冻与新鲜未成熟卵母细胞的数量比例为1:1~9；S3、将S2获得的体外成熟卵母细胞脱去颗粒细胞后置于体视荧光显微镜上，挑出被荧光标记的新鲜卵母细胞，剩余的即为冷冻卵母细胞；S4、在S3获得的新鲜卵母细胞和冷冻卵母细胞中分别挑选出含有第一极体的成熟卵母细胞，分别在体外产生早期胚胎，所述体外早期胚胎的产生方式包括体外受精、孤雌激活、体细胞核移植、单精子注射其中之一；S5、将S4获得的早期胚胎以15~20枚为一组，每组由冷冻和新鲜卵母细胞产生的早期胚胎数量比例为1:3~9，放入50μL的PZM-3液滴中共培养168h形成囊胚；S6、将S5获得的囊胚置于体视荧光显微镜上，挑出有荧光标记的新鲜卵母细胞产生的囊胚，剩余的即为冷冻卵母细胞产生的囊胚。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 云南省畜牧兽医科学院 一种提高少量冷冻未成熟卵母细胞体外发育能力的方法
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