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申请/专利权人：南京市计量监督检测院
申请日：2024-04-25
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222629A
主分类号：C12N15/85
分类号：C12N15/85;C12N15/47;C12N15/49;C12N7/01;C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明公开了一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质及其制备方法和应用，包括：采用化学合成法合成病毒目的基因序列，并通过无缝克隆将载体质粒和病毒目的基因片段进行连接；将连接产物转化至大肠杆菌中，扩增，提取质粒后进行测序分析，确保载体质粒中含有目的基因序列；将含有目的基因的载体质粒与辅助质粒共转染至细胞后，收集假病毒颗粒，纯化假病毒颗粒；本发明制备的假病毒标准物质可通过病毒滴度实验测定中和抗体的生物活性，同时具备特征核酸片段，可通过数字PCR进行绝对定量；最终将生物活性单位IU和病毒核酸单位copy实现量值的统一，可实现抗病毒药物生物活性的绝对定量检测。
主权项：1.一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1采用化学合成法合成病毒目的基因序列，在上下游插入XbaI和NotI酶切位点；2通过无缝克隆将载体质粒和病毒目的基因片段双酶切后酶连，得到酶连产物；3将酶连产物转化至大肠杆菌中，扩增，并采用碱裂解法提取质粒后进行测序分析，确保载体质粒中含有目的基因序列；4将含有目的基因的载体质粒与辅助质粒共转染至细胞后进行假病毒颗粒的包装，得到分泌在上清中已包装目的基因的假病毒颗粒；5收集步骤4中含有假病毒颗粒的培养基，经过0.22μm滤膜过滤并收集于无菌超速离心管中，80000g超速离心4h弃上清后，用Virusstorebuffer重悬沉淀，所得沉淀即为假病毒标准物质。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京市计量监督检测院 一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质及其制备方法和应用
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