申请/专利权人：浙江大学

申请日：2024-03-13

公开（公告）日：2024-06-25

公开（公告）号：CN118243845A

主分类号：G01N30/90

分类号：G01N30/90;G01N30/95;G01T1/204

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.25#公开

摘要：本发明公开了一种评估脂质吸收的再酯化测定方法，属于生物化学技术领域。本发明基于放射性同位素标记辅助液体闪烁计数技术提供了一种功能脂质再酯化评价方法，针对脂肪酸在辅酶a作用下反应生成酯酰辅酶a，利用放射性同位素标记辅酶a，通过计算产物中同位素回收率量化脂肪酸的再酯化率；针对甾醇与酯酰辅酶a反应生成甾醇脂肪酸酯，利用两种不同的同位素分别标记甾醇和酯酰辅酶a，通过检测产物中同时携带的两种同位素的强度表征反应物中酯酰辅酶a的减少量和产物中甾醇脂肪酸酯的生成量，量化甾醇的再酯化率。本发明以标记的辅酶a作为衡量代谢过程的评价物，将脂质代谢途径精确定位到辅酶a参与的酯化反应，排除未知代谢途径的影响。

主权项：1.一种评估脂质吸收的再酯化测定方法，其特征在于，当所述脂质为脂肪酸，所述方法包括以下步骤：1向单层培养的肠上皮细胞中加入待测脂肪酸，孵育使细胞负载待测脂肪酸；再加入含放射性同位素14C标记的辅酶a，孵育使得脂肪酸与辅酶a在细胞内发生再酯化反应生成14C标记的酯酰辅酶a；2反应终止后，取细胞培养液离心，收集有机层，除去溶剂得到代谢产物；3利用薄层色谱技术对代谢产物进行层析，切下酯酰辅酶a对应的条带，转移到含有闪烁液的闪烁瓶中，搅拌孵育，液体闪烁计数仪检测同位素14C强度，计算14C回收率表征待测脂肪酸再酯化率；当所述脂质为甾醇，所述方法包括以下步骤：1待测甾醇上标记放射性同位素3H，再加入到单层培养的肠上皮细胞中孵育；然后加入含放射性同位素14C标记的酯酰辅酶a，孵育使得甾醇与酯酰辅酶a在细胞内发生再酯化反应生成同时具有14C和3H标记的甾醇脂肪酸酯；2反应终止后，取细胞培养液离心，收集有机层，除去溶剂得到代谢产物；3利用薄层色谱技术对代谢产物进行层析，切下甾醇脂肪酸酯对应的条带，转移到含有闪烁液的闪烁瓶中，搅拌孵育，液体闪烁计数仪检测同位素3H和14C强度，按照公式Ⅰ计算得待测甾醇再酯化率； 其中给药剂量[14C]酯酰辅酶a为反应物中14C添加量，给药剂量[3H]甾醇为反应物中3H添加量，单层模型[14C]辅酶a为生成物中14C含量，单层模型[3H]甾醇脂肪酸酯为生成物中3H含量。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学 一种评估脂质吸收的再酯化测定方法及应用

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