申请/专利权人：深圳市第二人民医院(深圳市转化医学研究院)

申请日：2020-11-22

公开（公告）日：2024-06-25

公开（公告）号：CN112592896B

主分类号：C12N5/09

分类号：C12N5/09

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.25#授权;2021.04.23#实质审查的生效;2021.04.02#公开

摘要：本发明提供一种类器官的培养液及其培养方法，所述培养液包含基础培养基和特异性添加因子，所述培养液可提高类器官的培养成功率和可传代次数，尤其是肺腺癌类器官的培养成功率和可传代次数，解决了现有技术中类器官的培养成功率低和可传代次数少等问题。所述培养方法成功率高，培养所得类器官的可传代次数高。

主权项：1.一种肺腺癌类器官的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：A取肺腺癌组织块，剪碎，加入第一消化液消化，离心，得到第一沉淀物，洗涤第一沉淀物，离心，得到第二沉淀物；B将第二沉淀物用第二消化液消化，终止消化，离心，得第三沉淀物，洗涤第三沉淀物，离心，得第四沉淀物；C用培养基重悬第四沉淀物，过滤除去大块组织；细胞计数，离心，得第五沉淀物；用培养液和基质胶重悬第五沉淀物，接种；D步骤C中接种后的基质胶凝固后，加入类器官的培养液培养，所述培养液每2-3天更换一次，并先用含ROCK抑制剂的所述培养液培养1周，再用不含ROCK抑制剂的所述培养液培养1-2周，得到肺腺癌类器官；所述培养液由基础培养基和特异性添加因子组成；所述特异性添加因子由以下组分组成：第一抗生素溶液、生物缓冲液、GlutaMAX、B27无血清添加剂、成纤维细胞生长因子、人头蛋白、R-Spondin1、ROS抑制剂、烟酰胺、p38MAPK抑制剂、TGF-βI型受体抑制剂和任选的ROCK抑制剂；所述基础培养基为AdvancedDMEMF-12；所述第一抗生素溶液包含青霉素、链霉素和两性霉素B；所述生物缓冲液为HEPES；所述成纤维细胞生长因子为成纤维细胞生长因子7和成纤维细胞生长因子10；所述ROS抑制剂为N-乙酰半胱氨酸；所述p38MAPK抑制剂为SB202190；所述TGF-βI型受体抑制剂为A83-01；所述ROCK抑制剂为Y-27632盐酸盐；以培养液的总体积计，所述第一抗生素溶液的体积分数为0.5％-1.5％；所述生物缓冲液的体积分数为0.5％-1.5％；所述GlutaMAX的终浓度为15-25nmolL；所述B27无血清添加剂的体积分数为0.5％-1.5％；所述成纤维细胞生长因子的终浓度为20-80ngmL；所述人头蛋白的含量为50-150ngmL；所述ROS抑制剂的终浓度为1.00-1.50mM；所述烟酰胺的终浓度为8-12mM；所述p38MAPK抑制剂的终浓度为5-15μM；所述R-spondin1的终浓度为250-750ngmL；所述TGF-βI型受体抑制剂的终浓度为250-750nM；所述ROCK抑制剂的终浓度为5-15μM；余量为所述基础培养基。

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