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申请/专利权人：郑州轻工业大学
申请日：2021-08-11
公开（公告）日：2024-06-25
公开（公告）号：CN113624967B
主分类号：G01N33/569
分类号：G01N33/569;G01N33/543;G01N33/533;C08G83/00
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.25#授权;2021.11.26#实质审查的生效;2021.11.09#公开
摘要：本发明公开了一种磁性MOF@适配体以及用其高灵敏荧光检测食源性致病菌的方法，主要是先通过溶剂热及层层自主装法制备Fe3O4@ZIF‑8，利用目标菌的适配体对Fe3O4@ZIF‑8进行修饰制得Fe3O4@ZIF‑8@aptamer，实现对目标菌的捕获及分离，进一步利用FITC荧光标记的抗体对目标菌的识别使FITC荧光分子与Fe3O4@ZIF‑8金属基团表面的荧光共振能量转移，表现为FITC荧光增强。本发明公开的研究方法具有检测灵敏度高、特异性强、检测时间短等优点，适用于食品样品中食源性致病菌的快速检测。
主权项：1.一种利用磁性MOF@适配体检测食源性致病菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：a）将FITC标记的链霉亲和素和生物素标记的抗体作为FITC-抗体识剂在室温下孵育，于4℃保存；b）将不同浓度梯度的食源性致病菌、与磁性MOF@适配体置于37℃下反应20-40min后，PBS洗涤并重悬于PBS中，再加入等体积步骤a）制备所得FITC-抗体识别剂，37℃下偶联20-40min，磁分离并检测上清液的荧光强度；以荧光强度为纵坐标，以食源性致病菌浓度为横坐标，绘制标准曲线；c）将待测样品、与磁性MOF@适配体置于37℃下反应20-40min后，用PBS洗涤并重悬于PBS中，再加入等体积步骤a）制备所得FITC-抗体识别剂，37℃下偶联20-40min，磁分离并检测上清液的荧光强度；代入标准曲线，计算得出待测样品中的菌浓度;所述磁性MOF@适配体经下述步骤制备获得：1）在Fe3O4的无水甲醇分散液中，加入六水硝酸锌和2-甲基咪唑，混合均匀，然后于65-75℃水浴中加热15-30min，冷却至室温，洗涤、干燥，得到Fe3O4@ZIF-8粉末；2）将Fe3O4@ZIF-8用PBS洗涤并重悬于PBS中，加入适配体后于室温下震荡20-30min，然后加入脱脂奶粉封闭，再用PBS洗涤后重悬于PBS中，即得。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 郑州轻工业大学 一种磁性MOF@适配体以及利用其检测食源性致病菌的方法
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