申请/专利权人：贵州省烟草科学研究院

申请日：2024-01-27

公开（公告）日：2024-06-28

公开（公告）号：CN118255655A

主分类号：C07C49/743

分类号：C07C49/743;C07C49/717;C07C49/242;C07C45/79;C07C45/80;C07C35/36;C07C29/76;C07C29/86;C07C11/12;C07C7/00;C07C7/10;C07C7/12;A61P43/00

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.28#公开

摘要：本发明属于草本植物次生代谢活性成分提取分离技术领域，具体涉及一种以废弃烟叶为原料制备酪氨酸酶抑制活性成分的制备方法及应用。本发明以废弃烟叶为原料，经提取、萃取、分离和纯化得到7个成分：羟基黏霉菌酮、6R,9S‑3‑羰基‑α‑紫罗兰醇、+‑去氢催吐萝芙木醇、S‑3‑羟基‑紫罗兰酮、日齐素、4R,6S,E‑3,4,6‑三羟基‑4,8,8‑三甲基环辛烯醇‑2‑烯‑1‑酮、新植二烯。以本发明制备的7个成分纯度高，制备方法具有操作简单、周期短、成本低、可减少废弃烟叶造成的环境污染且能实现废弃物高值化利用的特点。本发明制备的废弃烟叶中的7个成分对酪氨酸酶具有显著抑制作用，可用于制备酪氨酸酶抑制剂。

主权项：1.废弃烟叶中酪氨酸酶抑制活性成分的制备方法，其特征在于，步骤包括：1废弃烟叶晾晒粉碎后，用95％的工业乙醇提取，温度控制在75℃～85℃提取3次，每次提取3～4h，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至原体积的2％～5％，得到烟叶粗提物的浓缩液；2加入浓缩液体积5倍的水，搅拌溶解，依次加入浓缩液等体积的石油醚萃取3次，得到石油醚萃取相，向石油醚萃取剩余相加入浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取3次，得到乙酸乙酯萃取相，向乙酸乙酯萃取剩余相加入浓缩液等体积的正丁醇萃取3次，得到正丁醇萃取相；将乙酸乙酯萃取相减压浓缩，得到烟叶乙酸乙酯萃取浸膏；将烟叶乙酸乙酯萃取浸膏以混合溶剂溶解后过常压硅胶柱，以体积比为20:1～1:1的石油醚：乙酸乙酯为流动相梯度洗脱，经薄层层析分析得到6个流分Z1～Z6；流分Z2采用常压硅胶柱，以体积比为25:1～1:1的二氯甲烷：丙酮为流动相梯度梯度洗脱，从中分离得到5个亚流分Fr.1-Fr.5；Fr.3采用SephadexLH-20填料进行凝胶柱层析，以氯仿：甲醇v:v1:1为洗脱剂，得到3个次级分，然后通过循环制备高效液相色谱纯化亚组分，得到化合物1、7、2和3；Fr.5采用SephadexLH-20填料进行凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂，得到4个次级分Fr.5-1-4，Fr.5-2过常压硅胶柱，以体积比为25:1的二氯甲烷:乙酸乙酯为流动相洗脱，得到化合物5；Fr5.4采用SephadexLH-20填料进行凝胶柱层析，以氯仿：甲醇v:v1:1为洗脱剂，得到的流分通过循环制备高效液相色谱纯化，分别得到化合物4和6。

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