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申请/专利权人：深圳先进技术研究院
申请日：2024-04-03
公开（公告）日：2024-06-28
公开（公告）号：CN118256558A
主分类号：C12N15/85
分类号：C12N15/85;C12N15/45;C12N5/10
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.28#公开
摘要：本发明涉及SeV病毒样颗粒的制备方法。所述方法包括：a构建包含加帽酶‑RNA聚合酶表达盒的质粒，所述加帽酶‑RNA聚合酶表达盒包含第一启动子序列以及嵌合型加帽酶‑RNA聚合酶编码序列；b将所述包含加帽酶‑RNA聚合酶表达盒的质粒稳定转染至哺乳动物细胞，得到稳转细胞系；c构建辅助质粒以及目的基因表达质粒，其中，各辅助质粒包含病毒封装辅助蛋白表达盒，所述目的基因表达质粒包含M基因、F基因以及HN基因被所述目的基因替换的仙台病毒基因组cDNA；d将所述各辅助质粒以及目的基因表达质粒瞬时转染至所述稳转细胞系。本发明还涉及上述方法在制备基因表达载体或RNA疫苗方面的用途。
主权项：1.一种仙台病毒病毒样颗粒的制备方法，所述方法包括：a构建包含加帽酶-RNA聚合酶表达盒的质粒，其中，所述加帽酶-RNA聚合酶表达盒包含第一启动子序列以及嵌合型加帽酶-RNA聚合酶编码序列；其中，所述嵌合型加帽酶-RNA聚合酶包含K1.5RNA聚合酶结构域以及非洲猪瘟病毒NP868R加帽酶结构域；b将所述包含加帽酶-RNA聚合酶表达盒的质粒稳定转染至哺乳动物细胞，得到稳转细胞系；c构建辅助质粒以及目的基因表达质粒，其中，各辅助质粒包含病毒封装辅助蛋白表达盒；其中，所述病毒封装辅助蛋白表达盒包含各病毒封装辅助蛋白的编码序列以及驱动所述病毒封装辅助蛋白表达的第二启动子；所述病毒封装辅助蛋白为仙台病毒的NP蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、HN蛋白以及L蛋白；所述目的基因表达质粒包含M基因、F基因以及HN基因被所述目的基因替换的仙台病毒基因组cDNA；其中，在所述仙台病毒基因组cDNA的3’端具有第二启动子；所述各第二启动子独立地为K1.5RNA聚合酶识别的启动子；以及d将所述各辅助质粒以及目的基因表达质粒瞬时转染至所述稳转细胞系。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 深圳先进技术研究院 制备仙台病毒病毒样颗粒的方法
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