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申请/专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要：本发明属于生物技术领域，涉及一种通过甲基苹果酸途径生产异亮氨酸的罗尔斯通氏菌工程菌株及其构建与生产方法。本发明通过表达甲基苹果酸合酶基因建立甲基苹果酸途径合成异亮氨酸；通过改造内源N‑乙酰葡糖胺转运系统实现菌株对葡萄糖的转运代谢；通过表达支链氨基酸外泌蛋白基因实现异亮氨酸在发酵液中的累积。通过调节辅酶平衡、解除反馈抑制、敲除代谢旁路、采用补料上罐发酵显著提升工程菌株通过甲基苹果酸途径合成异亮氨酸的生产能力。工程菌株以葡萄糖作为唯一碳源，发酵36小时的异亮氨酸产量为857mgL，以CO2作为唯一碳源，发酵25天的异亮氨酸产量为105mgL。
主权项：1.一种构建通过甲基苹果酸途径生产异亮氨酸的罗尔斯通氏菌工程菌株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：改造野生型罗尔斯通氏菌菌株的内源N-乙酰葡糖胺转运系统，包括步骤：将野生型罗尔斯通氏菌菌株的基于磷酸转移酶系统的N-乙酰葡糖胺转运蛋白基因nagE的第793位碱基从G突变为C，突变后的N-乙酰葡糖胺转运蛋白基因nagE的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示，并敲除所述N-乙酰葡糖胺转运蛋白的转录调节蛋白基因nagR，所述转录调节蛋白基因nagR的核苷酸序列如SEQIDNO：5所示；在野生型罗尔斯通氏菌菌株中表达甲基苹果酸合酶基因cimA与支链氨基酸外泌蛋白基因ygaZ和ygaH，其中，所述甲基苹果酸合酶基因cimA的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，所述支链氨基酸外泌蛋白基因ygaZ的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示，所述支链氨基酸外泌蛋白基因ygaH的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。
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权利要求：
百度查询： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 一种通过甲基苹果酸途径生产异亮氨酸的罗尔斯通氏菌工程菌株及其构建与生产方法
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