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炎症性肠病及纤维化体外精准模拟方法 

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申请/专利权人:淇嘉科技(苏州)有限公司

摘要:本发明提供了一种炎症性肠病及纤维化体外精准模拟方法,包含以下步骤:巨噬细胞包含型结肠类器官的诱导分化、传代扩增及扩增物质量检定,TGF‑β诱导造模、以及炎症性肠病与纤维化的体外模拟。该方法可在48h内诱导产生巨噬细胞极化、炎症反应、上皮‑间质转化、屏障损伤等一系列IBD病理表型;并在4天内进展为纤维化,呈现血清标志物升高、胶原沉积等临床病理特征。该疾病模型不但具备人源遗传背景,且能快速实现IBD的多尺度病理模拟,适合作为疾病解析与药效筛选的新一代研究工具。

主权项:1.一种炎症性肠病及纤维化体外精准模拟方法,其特征在于:该方法包括如下步骤:1)巨噬细胞包含型结肠类器官的构建诱导多能干细胞分化为具有造血祖细胞的肠管中后侧衍生物,然后择取下层2D细胞进行机械破碎,之后包被于基质胶中依次使用培养基3a和培养基3b继续分化形成结肠类器官;然后将得到的类器官转移至EP管后将其机械破碎,再次使用基质胶包被后,先使用培养基3a预培养,再继续使用培养基3b继续进行培养,每7-10天进行传代,每次传代均进行预培养操作;之后对扩增培养后的类器官进行检定,验证该类器官兼具结肠上皮细胞、间质细胞及肠驻留巨噬细胞,并验证巨噬细胞炎症介导功能;2)炎症性肠病及纤维化模拟2.1)IBD模拟使用TGF-β诱导48-72h步骤1)得到的类器官,并对类器官进行IBD病理表型分析,验证获得IBD模型;2.2)纤维化模拟连续诱导96-120h后,对类器官进行纤维化病理表型分析,验证获得纤维化模型。

全文数据:

权利要求:

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