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申请/专利权人：四川农业大学
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR特异性靶向猪Cavin‑1基因的sgRNA及应用，利用CRISPRCas9系统选择Cavin‑1基因敲除靶点，设计sgRNA序列及其互补序列；形成双链DNA片段；与带有Cas9内切酶的表达载体连接，筛选阳性克隆，获得重组载体；重组载体电转染猪成纤维细胞，筛选阳性克隆细胞，阳性克隆细胞作为核供体细胞与去核卵母细胞融合得到重构胚胎，然后移植到发情母猪，全期发育获得Cavin‑1基因敲除的克隆猪。本发明利用CRISPRCas9的基因编辑技术，获得了Cavin‑1敲除猪，为研究肌肉发育及肌肉相关疾病提供了动物模型。
主权项：1.一种Cavin-1基因敲除猪模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）利用CRISPRCas9系统选择Cavin-1基因敲除靶点，设计sgRNA对应的寡核苷酸序列及其互补序列；所述寡核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，互补序列如SEQIDNo.3所示；（2）合成SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示的寡核苷酸，退火形成双链DNA片段；（3）将步骤（2）得到的DNA片段与带有Cas9内切酶的表达载体pX458连接，筛选阳性克隆，获得重组载体；（4）将步骤（3）得到的重组载体电转染猪成纤维细胞，筛选阳性克隆细胞，所述猪成纤维细胞为巴马猪耳缘成纤维细胞；（5）将步骤（4）得到的阳性克隆细胞作为核供体细胞与去核卵母细胞融合得到重构胚胎，然后移植到发情母猪，全期发育获得Cavin-1基因敲除的克隆猪。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 四川农业大学 基于CRISPR特异性靶向猪Cavin-1基因的sgRNA及应用
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