买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：吉林大学

摘要：本发明提供了一种基于青鳉鱼胚胎生物标志物的水质安全诊断方法，通过青鳉鱼胚胎暴露试验，测定青鳉鱼胚胎个体水平生物标志物和分子水平生物标志物，并将各青鳉鱼胚胎生物标志物量化整合成青鳉鱼胚胎生物标志物响应指数从而更全面、更准确地量化水体污染程度，评价水体质量；与传统以污染物浓度为指标的评价模型相比，该方法可以真实地反映水环境安全状况；与青鳉鱼异常行为特征或单一毒理学数据建立的水质安全诊断模型相比，该方法将多种青鳉鱼胚胎生物标志物同时纳入模型体系，提高了水质生物监测系统的准确率和稳定性，同时基于青鳉鱼胚胎对水体质量更为敏感的特点，该方法能更及时地对水体质量作出准确评价。

主权项：1.一种基于青鳉鱼胚胎生物标志物的水质安全诊断方法，通过测定水体暴露下青鳉鱼胚胎的多种生物标志物，并将各生物标志物量化整合成青鳉鱼胚胎生物标志物响应指数以量化水体污染程度，准确评价水体质量，其特征在于，本方法具体步骤如下：步骤一、青鳉鱼胚胎暴露实验：在恒温28.0±0.1℃的条件下，将青鳉鱼受精卵置于一个半静态装置内进行暴露实验，暴露实验分为对照组和实验组，对照组设置清洁水体，实验组设置待测水体，每组设置m个平行实验，其中m≥3，每个平行实验中放置n粒青鳉鱼受精卵，其中n≥20，每个平行实验中暴露溶液的体积至少为半静态装置容积的12，暴露期间每天更换装置内至少23的暴露溶液；步骤二、测定青鳉鱼胚胎生物标志物：测定的生物标志物由青鳉鱼胚胎个体水平生物标志物和分子水平生物标志物组成；其中个体水平生物标志物由死亡率、畸形率、孵化率和孵化时间组成；分子水平生物标志物由BMP2基因和BMP4基因组成；1、个体水平生物标志物的测定方法如下：（1）使用显微镜观察记录胚胎的死亡率；（2）使用显微镜观察记录胚胎的畸形率；（3）使用显微镜观察记录胚胎的孵化率；（4）观察记录胚胎的孵化时间；（5）将得到的实验结果进行处理；2、分子水平生物标志物测定方法如下：（1）提取青鳉鱼胚胎或孵化幼鱼的总RNA；（2）对提取的总RNA进行反转录合成cDNA；（3）根据试剂盒说明书配制实时荧光定量PCR反应体系；（4）PCR扩增和荧光定量：进行PCR扩增，得到扩增曲线，并对数据进行处理，进而得到BMP2基因和BMP4基因的表达量；（5）将得到的实验结果进行处理；步骤三、生物标志物响应指数：将青鳉鱼胚胎死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因和BMP4基因的表达量进行整合，形成青鳉鱼胚胎生物标志物响应指数；青鳉鱼胚胎生物标志物响应指数Z的具体计算过程为：将青鳉鱼胚胎死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因和BMP4基因分别定义为A、B、C、D、E和F；分别计算青鳉鱼胚胎死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因和BMP4基因的偏离度RY，RY＝|PY-QY|QY，PY表示实验组中青鳉鱼胚胎死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因或BMP4基因的测定结果，QY表示对照组中青鳉鱼胚胎死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因或BMP4基因的测定结果，Y=A，B，C，D，E，F；根据实验组中死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因或BMP4基因的偏离度RY分别为实验组中死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因和BMP4基因赋予指定值SY，Y=A，B，C，D，E，F；当RY≤20%时，生物标志物的指定值SY设置为4；当20%RY≤50%时，生物标志物的指定值SY设置为3；当50%RY≤100%时，生物标志物的指定值SY设置为2；当RY100%时，生物标志物的指定值SY设置为1；根据死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因和BMP4基因所处的层级分别为死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因和BMP4基因赋予权重WY，Y=A，B，C，D，E，F；死亡率的权重WA设置为3.0；畸形率的权重WB设置为2.4；孵化率的权重WC设置为2.4；孵化时间的权重WD设置为2.4；BMP2基因的权重WE设置为1.9；BMP4基因的权重WF设置为1.9；将实验组的死亡率、畸形率、孵化率、孵化时间、BMP2基因和BMP4基因的指定值SA、SB、SC、SD、SE、SF和权重WA、WB、WC、WD、WE、WF全部代入Z＝∑SYWY∑WY，其中Y=A，B，C，D，E，F，计算得到实验组的生物标志物响应指数Z；步骤四、根据实验组的青鳉鱼胚胎生物标志物响应指数Z确定实验组水体的生物胁迫等级和水体污染程度；当3.00Z≤4.00时，表明水体对青鳉鱼胚胎或幼鱼无胁迫或轻度胁迫；当2.75Z≤3.00时，表明水体对青鳉鱼胚胎或幼鱼中等胁迫；当2.50Z≤2.75时，表明水体对青鳉鱼胚胎或幼鱼较大胁迫；当0.00≤Z≤2.50时，表明水体对青鳉鱼胚胎或幼鱼严重胁迫。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 吉林大学 一种基于青鳉鱼胚胎生物标志物的水质安全诊断方法