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申请/专利权人：浙江大学
摘要：本发明公开了一种基于DNA四面体探针的局域化催化发夹自组装扩增和荧光光谱检测癌症标志物miRNA的方法。包括混合癌症标志物miRNA靶标物的发夹形捕获探针Cp和磁珠，发夹形捕获探针Cp含有引发序列trigger，使含有引发序列trigger的Cp修饰在磁珠表面形成Cp修饰的磁珠MBCP等步骤，本发明使用链霉亲和素磁珠作为固定相来捕获靶标物分子，分离操作简单，效率较高；对癌症的生物标志物miRNA具有较高的检测灵敏度，对非小细胞肺癌生物标志物miR‑20a的检出限低至86.9pM，可根据癌症标志物miRNA靶标物的序列，可用于检测不同癌症类型的各种不同的miRNA生物标志物。
主权项：1.一种基于DNA四面体探针的局域化催化发夹自组装扩增和荧光光谱检测癌症标志物miRNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：1混合癌症标志物miRNA靶标物的发夹形捕获探针Cp和磁珠，发夹形捕获探针Cp含有引发序列trigger，使含有引发序列trigger的Cp修饰在磁珠表面形成Cp修饰的磁珠MBCP；2DNA四面体探针DTP由S1、S2、S3、S4四条DNA单链和发夹形探针Hp1合成，其中一条DNA单链上带有Hp2，而Hp2上带有荧光基团FAM和猝灭基团BHQ，把发夹形探针Hp1和Hp2修饰到DTP上，得到DNA四面体探针DTP；3由Cp修饰的磁珠MBCP和DNA四面体探针DTP组合，建立局域化催化发夹自组装扩增体系LCHA，MBCP悬液和DTP溶液分别低温保存；4将待检癌症标志物miRNA与局域化催化发夹自组装扩增体系LCHA中的MBCP和DTP先后混合均匀，当靶标物不存在时，MBCP上的Cp是封闭状态，荧光基团FAM的荧光被猝灭基团BHQ猝灭，当靶标物存在时，MBCP上的Cp与靶标物结合后打开发夹结构，暴露引发序列trigger，引发局域化催化发夹自组装的扩增反应，生成稳定的Hp1-Hp2双链DNA结构，Hp2上荧光基团FAM显现荧光；使用荧光光谱测量荧光基团FAM的荧光强度，实现检测癌症标志物miRNA。
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百度查询： 浙江大学 一种基于DNA四面体探针的局域化催化发夹自组装扩增和荧光光谱检测癌症标志物miRNA的方法
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