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申请/专利权人：沈阳农业大学

摘要：本发明提供一种土壤团聚体中微生物分泌物的提取方法。所述土壤团聚体微生物分泌物的提取方法包括以下步骤：步骤一：土壤团聚体分级：采用最佳含水量‑干筛法进行分级，将采集的原状土在室温条件下风干至理想含水量；当土壤达到该理想状态时，原状土块可以轻轻用手破碎至5‑7mm大小，之后利用自动振荡筛对土壤团聚体进行分级，移除土壤内所有可见的植物根系和石块，最后分为四级；步骤二：土壤团聚体中易提取球囊霉素含量提取与测定；步骤三：土壤团聚体中总球囊霉素含量提取与测定；步骤四：土壤团聚体中胞外多糖的测定；本发明具有缩短土壤团聚体中筛分时间、对土壤中的微生物分泌物组分影响较小、需要样品量少、操作简便、对设备要求低的优点。

主权项：1.一种土壤团聚体中微生物分泌物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：土壤团聚体分级：采用最佳含水量-干筛法进行分级，将采集的原状土在室温条件下风干至理想含水量；当土壤达到该理想状态时，原状土块可以轻轻用手破碎至5-7mm大小，之后利用自动振荡筛在150rmin-1的条件下对土壤团聚体进行分级，移除土壤内所有可见的植物根系和石块，最后将土壤团聚体分为四级：2000μm、2000-250μm、250-53μm和53μm；分级后的土壤团聚体放置在直径为15cm的聚乙烯桶中防止挤压破坏土壤团聚体结构；步骤二：土壤团聚体中易提取球囊霉素含量提取与测定：称量步骤一中某一粒级土壤团聚体1g样品，放入100mL离心管中，加入8mL提取液后盖紧盖子，同一批待测样品中加入一个空白对照，空白对照样本中只加提取液不加入土壤样品，将离心管放入恒温振荡器中，在120rmin-1条件下振荡30min，使其充分摇匀；再将离心管放入恒温箱中，在121℃条件下提取30min；最后将离心管放入离心机中，在4000rmin-1下离心10min，收集上清液，采用考马斯亮蓝显色法测定上清液中的易提取球囊霉素含量；步骤三：土壤团聚体中总球囊霉素含量提取与测定：称量步骤一中某一粒级土壤团聚体0.1g样品，放入100mL离心管中，加入4mL提取液后盖紧盖子，同一批待测样品中加入一个空白对照，空白对照样本中只加提取液不加入土壤样品，将离心管放入恒温振荡器中，在120rmin-1条件下振荡30min，使其充分摇匀；再将离心管放入恒温箱中，在121℃条件下提取30min；最后将离心管放入离心机中，在4000rmin-1下离心10min，反复提取并收集上清液，直至离心管液体中球囊霉素典型的红棕色消失，将收集后的上清液采用考马斯亮蓝显色法测定总球囊霉素含量；步骤四：土壤团聚体中胞外多糖的测定：称量步骤一中某一粒级土壤团聚体3g样品，放入干燥洁净的离心管中，加入25mL0.01molL-1CaCl2溶液，拧紧盖子，于4℃恒温振荡器中以120rmin-1振荡30min，然后以5000rmin-1的条件下在离心机中离心30min，去除上清液；在离心管中加入约5g阳离子交换树脂和25mLPBS缓冲液，拧紧盖子，用涡旋仪混合溶液和沉淀，再放入恒温振荡器中以200rmin-1振荡2h，然后以6000rmin-1的条件下离心30min，得到上清液，采用苯酚-硫酸法进行测定胞外多糖含量。

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