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申请/专利权人：云南瑞升烟草技术(集团)有限公司

摘要：本发明涉及植物组培繁殖技术领域，具体来说是一种斑克木组培快繁方法及应用，具体为：选取斑克木种子为外植体，在流水下冲洗后进行消毒，消毒好的种子诱导发芽，选取成熟的合子胚和子叶体细胞胚诱导，然后进行体细胞胚增殖培养，最后进行体细胞胚植株生根培养。本发明区别于普通组培快繁中通过诱导丛生芽增殖的模式，通过诱导斑克木体细胞胚的方式，解决木本植物用组培的方式培育中普遍存在的增殖困难，生根困难、褐化严重、研发周期长等问题的弊端，使用体细胞胚胎发生途径进行植物再生，不仅能够缩短研发周期与生长时间，体细胞还能做成人工种子，方便保存且直接播种。

主权项：1.斑克木组培快繁方法，其特征在于，步骤包括：（1）外植体选择与清洁：选择健康无病害的种子作为外植体材料；（2）外植体消毒；（3）芽诱导：种子接种于12MS空白培养基中，温度24±2℃下完全暗培养40～45天，待种子萌发后，将温度调整至24±2℃，按每日光照10～12h、光强2000～3000lx，光暗交替培养5～10天；（4）体细胞胚诱导：取萌发的种子的成熟合子胚和子叶，接种于体细胞胚诱导培养基中，温度24±2℃，在16～20℃下暗培养10～14d，之后转移至24～26℃、光照下培养16～20d，形成体细胞胚；所述诱导培养基的配方为：改良12MS+MT0.2～0.5mgL+TDZ0.2～0.5mgL+IBA0.05～0.1mgL+Vc80～100mgL+酵母味素5～10gL+黄连和马齿苋混合物25～30gL；所述改良12MS培养基的配方为：将其中的硝酸钾调整为900mgL，氯化钙改为硝酸钙、浓度为150mgL，其余元素不变；（5）体细胞胚增殖培养：诱导出的体细胞胚分离母体，接种于增殖培养基中，温度24±2℃、每天照2000～3000lx光12h进行光暗交替培养20～30天；所述增殖培养基配方为：改良WPM+BR0.05～0.1mgL+LFS1.3～2.0mgL+NAA0.01～0.05mgL+酵母味素10～15gL+黄连和马齿苋混合物15～20gL；所述改良WPM培养基的配方为：将其中磷酸二氢钾调整为200mgL，硫酸镁调整为400mgL，其余元素不变；（6）体细胞胚植株再生培养：将单个体细胞胚转接进入植株再生培养基中，温度24±2℃、每日照3000～4000lx光14h进行光暗交替培养15～20天，开始生根后置于遮阴率75～85%的日光下培养10～15天；所述植株再生培养基的配方为：改良12WPM+NAA0.1～0.5mgL+IBA0.05～0.3mgL+GA30.05～0.1mgL+活性炭0.2～0.4gL；所述改良12WPM培养基的配方为：将其中磷酸二氢钾调整为100mgL，硫酸镁调整为200mgL，其余元素不变。

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