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申请/专利权人：浙江理工大学绍兴生物医药研究院有限公司
摘要：本发明公开的是一种分泌表达林蛙皮肤活性肽RaFSAP3的方法，获取林蛙皮RNA，逆转录cDNA；应用设计的特异性引物和通用引物进行扩增，获得林蛙皮肤新的活性肽基因序列；根据RaFSAP3的ORF序列，设计引物、酶切，以测序成功的重组pMD‑19T载体作为模板，目的片段的PCR扩增，电泳鉴定、纯化，构建重组质粒；重组质粒转入大肠杆菌，使用抗生素进行筛选，诱导表达、融合蛋白的表达检测，酶切得到单体活性肽，本发明有效地避免了活性肽对工程菌的抑制作用，提高其表达量，为通过重组克隆技术大规模发酵生产蛙皮活性肽打下基础。
主权项：1.一种分泌表达林蛙皮肤活性肽RaFSAP3的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：1获取林蛙皮RNA，oligdT-adaptor引物逆转录cDNA；2用BioEdit软件，对蛙类已知的皮肤活性肽前肽和信号肽保守结构域进行多序列比对和保守性分析，应用设计的特异性引物和M13-M4通用引物进行PCR扩增，测序分析，获得林蛙皮肤新的活性肽基因序列；3根据已得的RaFSAP3的ORF序列，设计引物，引入XhoI和BamHI酶切位点，以测序成功的重组pMD-19T载体作为模板，进行目的片段的PCR扩增，取PCR产物进行电泳鉴定、纯化，目的片段与表达载体pET-His-SUMO进行连接构建重组质粒；4重组质粒转入大肠杆菌BL21，使用Amp抗生素进行筛选，IPTG诱导表达；5融合蛋白的表达检测，ULP1酶酶切得到单体活性肽。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江理工大学绍兴生物医药研究院有限公司 一种分泌表达林蛙皮肤活性肽RaFSAP3的方法
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