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申请/专利权人：山东金城生物药业有限公司;山东理工大学
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种以葡萄糖为底物从头合成胞磷胆碱的重组工程菌、制备方法及应用。本发明所提供的重组工程菌具体是：以BS168N为出发菌，首先将S.cerevisiae来源的磷脂酰乙醇胺N‑甲基转移酶基因PEM1和磷脂酰‑N‑乙醇胺N‑甲基转移酶基因PEM2整合到BS168N的基因组上进行诱导表达，打通磷脂酰乙醇胺到磷脂酰胆碱的合成通路；随后，将S.cerevisiae的CKI和CCT基因继续整合到表达PEM1‑PEM2的BS168N基因组上，打通胆碱到CDPC的合成通路，获得所述的重组工程菌，进一步将该重组工程菌进行摇瓶发酵，即可实现以葡萄糖为底物从头合成胞磷胆碱。本发明的方法为将来工业上通过合成生物学手段，构建从头高效合成胞磷胆碱的细胞工厂提供了基础研究和理论依据。
主权项：1.一种以葡萄糖为底物从头合成胞磷胆碱的重组工程菌，其特征在于，所述的重组工程菌是以枯草芽孢杆菌BS168N为底盘，进行如下改造获得的：（1）对枯草芽孢杆菌BS168N进行改造：将酿酒酵母来源的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶基因PEM1和磷脂酰-N-乙醇胺N-甲基转移酶基因PEM2组成人工操纵子Pxyl-PEM2-PEM1，整合到枯草芽孢杆菌BS168N基因组上的lacA位点进行诱导表达；所述的枯草芽孢杆菌BS168N是通过将Para-neo整合到野生型枯草芽孢杆菌168基因组上的araR位点得到的；（2）重组工程菌的构建：将人工操纵子TP2-CCT-CKI整合到（1）中已表达Pxyl-PEM2-PEM1的枯草芽孢杆菌基因组上，即构建成能够以葡萄糖为底物从头合成胞磷胆碱的重组工程菌；人工操纵子TP2-CCT-CKI是由胆碱激酶基因CKI和磷酸胆碱胞苷酰转移酶基因CCT与组成型强启动子TP2组成。
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百度查询： 山东金城生物药业有限公司 山东理工大学 一种以葡萄糖为底物从头合成胞磷胆碱的重组工程菌、制备方法及应用
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