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一种线性共价闭合dsDNA的制备方法 

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申请/专利权人:通用生物(安徽)股份有限公司

摘要:本发明公开了一种线性共价闭合dsDNA的制备方法,属于核酸制备技术领域,该制备方法包括如下步骤:第一步、特异性线性dsDNA构建;第二步、特异性线性dsDNA连接;第三步、无细胞酶促生产串联线性dsDNA分子;第四步、在促进Lc‑dsDNA生产的条件下,使在第三步中产生的扩增DNA接触至少一种原核端粒酶;第五步、纯化回收。所述方法用于在无细胞酶促生产Lc‑dsDNA分子,优选使用有且只含有目的片段、端粒酶序列和特异性酶切位点的环状dsDNA作为合成模板。本发明首先去除载体冗余部分,再通过无细胞酶促生产Lc‑dsDNA,可大大减少冗余残留,节约纯化成本,有利于放大生产。

主权项:1.一种线性共价闭合dsDNA的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:第一步、特异性线性dsDNA构建:所述特异性线性dsDNA包括目的基因、端粒酶序列和酶切位点序列;第二步、特异性线性dsDNA连接:根据第一步构建的特异性线性dsDNA,使用对应核酸内切酶切割,后与DNA连接酶共孵育,生成特异性环状dsDNA;第三步、无细胞酶促生产串联线性dsDNA分子:使用目的片段上不同方向特异性引物对和DNA聚合酶对由第二步构成的特异性环状dsDNA进行无细胞酶促反应;第四步、在促进线性共价闭合dsDNA生产的条件下,使在第三步中产生的扩增DNA接触至少一种原核端粒酶;第五步、纯化回收。

全文数据:

权利要求:

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