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申请/专利权人：中国农业科学院特产研究所
摘要：本发明公开了鹿茸干细胞株的建立及其扩大培养方法，属于干细胞培养的技术领域。具体包括如下步骤：鹿茸干细胞的分离培养；鹿茸干细胞的原代培养；鹿茸干细胞的传代培养；建立鹿茸干细胞大规模培养体系：在三维培养体系中细胞驯化；利用生物反应器进行3D培养。利用本发明中的传代培养体系，不仅可以提高鹿茸干细胞的增殖速度，而且可以防止鹿茸干细胞聚集生长，形成克隆。与普通培养基相比，鹿茸干细胞的倍增时间明显缩短。
主权项：1.鹿茸干细胞株的建立及其扩大培养方法，其特征在于，具体包括如下步骤：S1、鹿茸干细胞的分离培养：鹿茸干细胞来源于健康公鹿生茸区骨膜组织、鹿角柄骨膜组织和鹿茸间充质层组织；S2、鹿茸干细胞的原代培养：S2.1、取出S1步骤中的鹿茸干细胞，清洗、切割；S2.2、转入并在离心管中消化、离心弃上清液，加DMEM原代培养液洗去消化液，离心、弃上清液，收集沉淀；S2.3、取步骤S2.2中获得的沉淀，置于培养箱中先培养，当细胞达到70-80%汇合，将细胞用胰蛋白酶进行消化，收集细胞，获得原代鹿茸干细胞，冻存备用；S3、鹿茸干细胞的传代培养：对步骤S2中获得的细胞进行传代培养，将能够稳定传代的细胞进行连续传代至20-50代，建立细胞株，并对每一代细胞分别进行冻存；对不能够顺利传代的细胞进行永生化处理，获得永生化的鹿茸干细胞细胞株；永生化鹿茸干细胞株的制备方法为：S3.1、构建SV40T抗原病毒载体：将表达SV40T抗原基因的逆转录病毒载体和包装载体共转染人胚肾293细胞系HEK293，包装出表达SV40T抗原的逆转录病毒；S3.2、慢病毒转染：将不能稳定传代的鹿茸干细胞的原代细胞传至第2-3代，添加含3-4μgml聚凝胺的逆转录病毒，病毒滴度为1×108TUml，感染2天后，换液并在培养液中添加0.3-0.4mgml的潮霉素B筛选14天，形成筛选后的干细胞集落；S3.3、传代：将筛选后的干细胞集落扩增并进行连续传至30代以上，即得到永生化的鹿茸干细胞系，冻存备用；S4、建立鹿茸干细胞大规模培养体系：S4.1、在三维培养体系中细胞驯化；S4.2、利用生物反应器进行3D培养。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国农业科学院特产研究所 鹿茸干细胞株的建立及其扩大培养方法
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