买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：西部生科生物医学科技(成都)有限公司

摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种富含脂肪干细胞外泌体的组合物及其应用，采用来源于人体废弃脂肪组织分离培养的脂肪干细胞，纯化干细胞和外泌体的扩增，脂肪干细胞外泌体的提取，并利用聚丙烯酸‑co‑甲基丙烯酸共聚物作为pH敏感性材料包裹外泌体，利用赖氨酸为外泌体微胶囊引入正电荷，与聚N‑异丙基丙烯酰胺通过电荷吸引相互作用吸附，同时完成二次包裹，最后利用羧甲基壳聚糖和海藻酸钠制备获得的复合水凝胶负载微胶囊，得到外泌体组合物；本发明制备的外泌体组合物具有极好的生物相容性和促进细胞增殖能力。

主权项：1.一种富含脂肪干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述富含脂肪干细胞外泌体的组合物的制备方法包括以下步骤：S1：脂肪干细胞外泌体的提取；S2：干细胞外泌体的封装；S3：外泌体中间层结构复合；S4：微胶囊外壳层凝胶结构负载；步骤S1中所述脂肪干细胞外泌体的提取步骤如下：C1：将人体脂肪干细胞加入DMEMF12培养基中悬浮，然后滴加到标准的组织培养板上，培养，每隔1～2天更换一次DMEMF12培养基；将脂肪干细胞培养至融合度80%，加入胰蛋白酶-EDTA溶液以降低细胞融合度进行消化传代，同时换用无血清培养基培养细胞，获得脂肪干细胞；C2：将步骤C1中获得的脂肪干细胞低速离心，取上清液超声处理，过滤，获得滤液；将滤液离心处理，过滤，洗涤，加入蔗糖，冷冻干燥，获得脂肪干细胞外泌体；步骤S2中所述干细胞外泌体的封装步骤如下：D1：将脂肪干细胞外泌体分散于PBS缓冲溶液中，混合均匀，获得外泌体溶液；将聚丙烯酸-co-甲基丙烯酸共聚物溶解在去离子水中，获得聚合物溶液；D2：将步骤D1中制备的外泌体溶液持续缓慢加入步骤D1中制备的聚合物溶液中，加入戊二醇，利用HCl溶液和NaOH溶液调节pH，室温下搅拌，离心，洗涤，真空冷冻干燥，获得外泌体微胶囊；步骤S3中所述外泌体中间层结构复合步骤如下：E1：将N-异丙基丙烯酰胺、过硫酸铵和N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶解在去离子水中，溶解均匀，获得混合溶液；加热混合溶液，持续充入氮气，反应结束后，冷却至室温，离心，真空干燥，获得聚N-异丙基丙烯酰胺；E2：将步骤D2中制备外泌体微胶囊加入去离子水中制备为微胶囊悬浮液，然后加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，控制温度30℃，搅拌，加入赖氨酸溶液，控制温度30℃，搅拌，离心，过滤，去离子水洗涤，真空干燥，获得改性微胶囊；E3：将步骤E1中制备的聚N-异丙基丙烯酰胺加入去离子水中制备为聚N-异丙基丙烯酰胺溶液，将步骤E2中制备的改性微胶囊加入去离子水中制备为改性微胶囊悬浮液；将聚N-异丙基丙烯酰胺溶液与改性微胶囊悬浮液混合，加入纳米银颗粒，水浴加热控制温度32～35℃，搅拌，反应完成后冷却至室温，离心，过滤，去离子水洗涤，真空干燥，获得外泌体复合微胶囊；步骤S4中所述微胶囊外壳层凝胶结构负载步骤如下：H1：将羧甲基壳聚糖和海藻酸钠分别溶解在去离子水中，制备为2～3wt%浓度的羧甲基壳聚糖溶液和海藻酸钠溶液；将步骤E3中制备的外泌体复合微胶囊加入去离子水中制备为悬浮液；H2：将步骤H1制备的羧甲基壳聚糖溶液和海藻酸钠溶液以1:1的比例混合，控制温度4℃，搅拌，加入步骤H1制备的外泌体复合微胶囊悬浮液和KOH溶液，继续搅拌，在此过程中滴加CaCl2溶液，并用NaOH溶液和HCl溶液保持pH为中性，反应结束，洗涤，冷冻干燥，获得外泌体微胶囊组合物。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 西部生科生物医学科技(成都)有限公司 一种富含脂肪干细胞外泌体的组合物及其应用