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申请/专利权人：吉林大学

摘要：本发明属于医药技术领域，具体公开了一种具有促造血作用的灰肉红菇多糖及其制备方法和应用，通过热水浸提法提取灰肉红菇中的可溶性营养成分，并由乙醇醇沉法、离子交换柱层析和凝胶柱层析的方法纯化其中的活性多糖组分，发现该活性多糖组分主要由半乳糖、甲氧基半乳糖、葡萄糖、甘露糖、岩藻糖组成。经进一步实验发现，该活性多糖组分能够通过增加化疗所致造血功能障碍小鼠体内CD4+T细胞的表达从而促进机体造血功能的恢复，具有很好的促造血功能，这对灰肉红菇多糖功能性食品的研发具有重大的意义。

主权项：1.一种具有促造血作用的灰肉红菇多糖，其特征在于：具有促造血作用的灰肉红菇多糖的制备方法，包括以下步骤：S1、取灰肉红菇子实体烘干后，使用粉碎机将子实体粉碎；S2、按照灰肉红菇子实体质量：去离子水体积=1：30-50的比例混合，于60-90℃的温度下热水浸提2-4小时；重复提取两次，合并两次提取液，并旋蒸浓缩提取液；S3、利用Sevag方法除去提取液中的蛋白组分，并弃去有机试剂，上层提取液进一步旋蒸、透析；S4、向上述透析后的液体中加入无水乙醇溶液，使乙醇终浓度为80%，充分混匀后于4℃静置12小时，静置后于6000rpm离心20分钟，收集沉淀，吹干乙醇后进行冻干，即得灰肉红菇粗多糖；S5、使用超纯水溶解灰肉红菇粗多糖，配制的多糖溶液浓度为0.05-0.1gmL，充分溶解后过0.45um滤膜，并上样于DEAESepharoseFF离子交换柱上，洗脱流动相分别为0、0.1、0.3MNaCl溶液，并将各流动相洗脱的多糖组分依次命名为RGP-A、RGP-B、RGP-C，流速为1-2mLmin，每管收集7mL液体；采用苯酚-硫酸法对收集得到的液体中的多糖含量进行测定，绘制洗脱曲线并收集浓度较高的多糖管，旋蒸、透析、冻干；S6、经DEAE层析柱分离纯化，最终得到两种主要的多糖组分，即RGP-A、RGP-B；使用K562细胞，结合XTT法、细胞凋亡检测法、联苯胺染色法、westernblot法分析筛选具有更好的体外促造血活性的RGP-A应用于后续的纯化；S7、将RGP-A依次上样于HiPrepTM2660SephacrylTMS-400和Ezload2660Chromdex200pg凝胶柱，洗脱流动相为0.15MNaCl，流速为1mLmin，每管收集2-4mL液体；采用苯酚-硫酸法对收集得到的液体中的多糖含量进行测定，绘制洗脱曲线并收集浓度较高的多糖管，旋蒸、透析、冻干，最终即得具有促造血作用的灰肉红菇纯化多糖。

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