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申请/专利权人：上海师范大学

摘要：本发明提供一种ePE‑P3‑max引导编辑系统、核酸分子、重组载体、重组转化子及应用。本发明提供的ePE‑P3‑max引导编辑系统包括pegRNA和融合蛋白；pegRNA的5’端到3’端依次包括tRNAGly、切割编辑链的靶点序列、esgRNA骨架、逆转录模板序列、引物结合位点序列、连接序列、tevopreQ1基序和HDV核酶；融合蛋白是由NC蛋白、M‑MLVRTΔRNaseH、SpCas9R221KN394KH840A和定位信号肽融合而成。本发明通过对pegRNA和融合蛋白进行优化改造，得到了一个基因编辑活性较高的引导编辑系统ePE‑P3‑max。

主权项：1.一种ePE-P3-max引导编辑系统，其特征在于，包括pegRNA和融合蛋白；所述pegRNA的5’端到3’端依次包括tRNAGly、切割编辑链的靶点序列、esgRNA骨架、逆转录模板序列、引物结合位点序列、连接序列、tevopreQ1基序和HDV核酶；所述tRNAGly选自A1、A2、A3中的一种：A1如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列中T替换为U后的RNA；A2将SEQIDNO:2所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和或缺失和或添加且具有相同功能的RNA；A3与A1或A2限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA；所述esgRNA骨架选自B1、B2、B3中的一种：B1如SEQIDNO:3所示的核苷酸序列中T替换为U后的RNA；B2将SEQIDNO:3所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和或缺失和或添加且具有相同功能的RNA；B3与B1或B2限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA；所述tevopreQ1基序选自C1、C2、C3中的一种：C1如SEQIDNO:4所示的核苷酸序列中T替换为U后的RNA；C2将SEQIDNO:4所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和或缺失和或添加且具有相同功能的RNA；C3与C1或C2限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA；所述HDV核酶选自D1、D2、D3中的一种：D1如SEQIDNO:5所示的核苷酸序列中T替换为U后的RNA；D2将SEQIDNO:5所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和或缺失和或添加且具有相同功能的RNA；D3与D1或D2限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA；所述融合蛋白由NC蛋白、M-MLVRTΔRNaseH、SpCas9R221KN394KH840A和定位信号肽融合而成；所述NC蛋白选自F1、F2、F3中的一种：F1氨基酸序列如SEQIDNO:9所示；F2与SEQIDNO:9所示的氨基酸序列具有至少80％同一性且具有相同催化功能的蛋白；F3SEQIDNO:9所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和或缺失和或添加且具有相同催化功能的蛋白；所述M-MLVRTΔRNaseH选自G1、G2、G3中的一种：G1氨基酸序列如SEQIDNO:10所示；G2与SEQIDNO:10所示的氨基酸序列具有至少80％同一性且具有相同催化功能的酶；G3SEQIDNO:10所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和或缺失和或添加且具有相同催化功能的酶；所述SpCas9R221KN394KH840A选自H1、H2、H3中的一种：H1氨基酸序列如SEQIDNO:11所示；H2与SEQIDNO:11所示的氨基酸序列具有至少80％同一性且具有相同催化功能的酶；H3SEQIDNO:11所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和或缺失和或添加且具有相同催化功能的酶。

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权利要求：

百度查询： 上海师范大学 ePE-P3-max引导编辑系统、核酸分子、重组载体、重组转化子及应用