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申请/专利权人：天津科技大学;浙江震元生物科技有限公司

摘要：本发明提供了一种苯丙氨酸大肠杆菌生产菌及其应用，所述菌株通过利用代谢工程手段对野生型大肠杆菌E.coilW3110进行改造获得，是高产、稳定、具有工业应用价值的L‑苯丙氨酸基因工程菌，其构建方法包括：1、DAHP酶aroGfbr、aroF基因编码的过表达与解除反馈抑制；2、CMPDT酶pheAfbr基因编码的过表达与解除反馈抑制；3、芳香族氨基酸转氨酶tyrB基因编码的过表达；4、阻遏蛋白TyrR、TrpR、lacI基因编码的敲除；5、磷酸烯醇丙酮酸合酶pps基因编码的过表达；6、转酮酶tktA基因编码的过表达；7、PTS系统的改造；8、苯丙氨酸转运蛋白yddG基因编码强化。

主权项：1.一种苯丙氨酸大肠杆菌生产菌，其特征在于：为大肠杆菌菌株F-12，是通过野生型大肠杆菌E.coilW3110改造得到的，获得方法如下：以野生型大肠杆菌E.coilW3110为出发菌株，敲除莽草酸途径关键阻遏蛋白基因tyrR，并同时在该基因位点整合由trc启动子强化的解除反馈抑制的预苯酸脱水酶基因pheAfbr；敲除假基因yjit，并在此位点再次整合由trc启动子强化的解除反馈抑制的预苯酸脱水酶基因pheAfbr；敲除trc启动子阻遏蛋白基因LacI；敲除菌株原有的CMPDT酶基因pheA，并在该位点整合由trc启动子强化的转氨酶基因tyrB；敲除假基因mbha，并在此位点整合由trc强启动子启动的解除反馈抑制的DS酶基因aroGfbr；敲除假基因位点yghx，并在此位点整合由trc启动子强化的aroF；敲除假基因yghE，并在此位点整合由trc启动子强化的芳香族氨基转氨酶基因tyrB；敲除莽草酸途径关键阻遏蛋白基因trpR，并同时在此位点整合由trc启动子强化的转酮酶基因tktA；敲除假基因位点ygay，并在此位点整合由trc启动子强化的磷酸烯醇式丙酮酸合酶基因pps；敲除编码PTS系统中的ptsG基因，并在此位点整合由M-12启动子启动的glf基因，后者编码葡萄糖透过酶；敲除了假基因yciQ，并在此位点整合了由trc启动子强化的glk基因，后者编码葡萄糖磷酸化酶；敲除了假基因ylbE，并在此位点整合了由trc启动子强化的yddG基因，后者编码芳香族氨基酸外排蛋白；其中，所述trc启动子具有序列表SEQIDNO.1所示核苷酸序列；aroGfbr基因具有序列表SEQIDNO.2所示核苷酸序列；aroF基因具有序列表SEQIDNO.3所示核苷酸序列；pheAfbr基因具有序列表SEQIDNO.4所示核苷酸序列；LacI基因具有序列表SEQIDNO.5所示核苷酸序列；tktA基因具有序列表SEQIDNO.6所示核苷酸序列；pps基因具有序列表SEQIDNO.7所示核苷酸序列；tyrB基因具有序列表SEQIDNO.8所示核苷酸序列；glk基因具有序列表SEQIDNO.9所示核苷酸序列；M-12启动子序列为序列表SEQIDNO.11所示核苷酸序列；yddG基因具有序列表SEQIDNO.12所示核苷酸序列；glf基因具有序列表SEQIDNO.13所示核苷酸序列。

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