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申请/专利权人：合肥达音生物工程研究有限公司

摘要：本发明属于生物材料技术领域，具体涉及一种含有致密内皮层的三层血管及其制备方法和应用。中鞘液以及内鞘液，利用三同轴针管首先获得双层血管结构，再通过注射内皮细胞‑胶原混合溶液，培养获得致密的内皮层，最终得到三层血管。本发明优化了水凝胶成分及配比，制备的水凝胶作为不仅方便制备血管，还能促进血管内皮细胞贴附，有利于形成完整且致密的内皮层，同时在中膜层中添加自组装的弹性蛋白，显著提高了血管的弹性。本发明制备血管的材料生物相容性较好，有利于细胞存活，所制备的血管组织可用于研究血管相关的疾病，例如肿瘤转移等，并作为外科材料为可移植的血管提供一种安全、高效的获取手段。

主权项：1.一种含有致密内皮层的三层血管的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.制备双层血管结构S11.按以下配方分别制备外鞘液、中鞘液和内鞘液：外鞘液：包含终浓度为5-8mgmL的I型鼠尾胶原，1-2％wv海藻酸钠，0.25-1％wvLAP，3-5％wvGelMA，密度为1-5×106个mL的成纤维细胞，其余为DMEM完全培养基；中鞘液：包含终浓度为3-6mgmL的I型鼠尾胶原和10-50mgmL的自组装类弹性蛋白，1-2％wv海藻酸钠，密度为1-5×106个mL的平滑肌细胞，其余为DMEM完全培养基；所述自组装类弹性蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；内鞘液：包含终浓度为2％wvPluronicF-127，3％wvCaCl2溶液，其余为DMEM完全培养基；S12.将三同轴针头竖直布置在2％wvCaCl2溶液上方，所述外鞘液、中鞘液和内鞘液分别独立连接所述三同轴针头的外层腔体、中层腔体和内层腔体，控制所述外鞘液、中鞘液和内鞘液同时出液，液体经过三同轴针头形成中空管结构，并进入CaCl2溶液中定型，待所述外鞘液、中鞘液和内鞘液稳定出液后，收集定型产物，得到由外鞘液和中鞘液组成的双层血管结构；S2.制备含有致密内皮层的三层血管S21.步骤S12制备的双层血管结构在405nm紫外光下照射1min，PBS清洗，置于培养基培养5h；S22.5h后取出所述双层血管结构，向所述双层血管结构的中心管腔注射纤连蛋白溶液，培养15min；S23.15min后分两次向所述中心管腔注射内皮细胞-胶原混合溶液，所述混合溶液包含终浓度为1×106个mL的内皮细胞和2mgmL的I型鼠尾胶原；两次注射间隔12h，第二次注射后将双层血管结构翻转一次，继续培养；待内皮细胞均匀贴附后，完成培养，得到所需含有致密内皮层的三层血管。

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