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一种鉴定CreERT2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法 

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申请/专利权人:重庆国际免疫创新中心有限公司

摘要:本发明公开了一种鉴定CreERT2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法,包括以下步骤,步骤一:给出生后5天的Sox9creERT;R26zsgreen小鼠腹腔注射他莫昔芬标记,一周后股骨头取材,流式分选CD45阳性造血细胞、CD31阳性血管内皮细胞,提取基因组;步骤二:根据LoxP‑Stop‑LoxP终止密码子序列及Cre酶剪切原理设计上下游引物;步骤三:PCR鉴定实验组和对照组终止密码子序列剪切情况。本发明基于Cre‑LoxP位点特异性重组系统的原理,被剪切的细胞及其分化的下游细胞均不含终止密码子序列,在Loxp两侧设计引物通过PCR鉴定终止密码子序列有无来示踪下游分化的细胞来源。

主权项:1.一种鉴定CreERT2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法,其特征是:包括以下步骤,步骤一:给出生后5天的Sox9creERT;R26zsgreen小鼠腹腔注射他莫昔芬标记,一周后股骨头取材,流式分选CD45阳性造血细胞、CD31阳性血管内皮细胞,提取基因组;步骤二:根据LoxP-Stop-LoxP终止密码子序列及Cre酶剪切原理设计上下游引物;步骤三:PCR鉴定实验组和对照组终止密码子序列剪切情况。

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