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申请/专利权人：徐州医科大学

摘要：本发明公开了一种脲酶响应型膀胱癌miRNA检测纳米探针的制备方法及应用，该方法将磁性Fe3O4纳米粒子和脲酶连接到SiO2表面，将修饰了荧光基团和淬灭基团的H1、H2分别连接到金纳米棒和Fe3O4表面，制备出能够特异性捕获靶miRNA且释放荧光的Janus纳米探针。该方法稳定可靠、重复性好，所制备的Janus纳米探针具有较好的稳定性和分散性，能通过脲酶驱动在尿液环境中充分扩散，实现H1、H2与miRNA特异性结合；再通过磁分离和富集效应，实现信号放大；通过脲酶催化充分捕获靶miRNA，实现无创检测。此外，hDNA的稳定结构也在一定程度上提高了检测的灵敏度和特异性，为膀胱癌的无创诊断提供新思路。

主权项：1.一种脲酶响应型膀胱癌miRNA检测纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1将100～500mgCTAB与0.5～2mg三水合氯金酸、10～50mg硼氢化钠制备的种子溶液加入到由2～5gCTAB、0.1～0.5g油酸钠、15～40mg三水合氯金酸、0.5～1mL盐酸、10～15mg硝酸银和2～5mg抗坏血酸制备的生长液中，待两种溶液混合均匀后，在20～50℃下静置10～30h得到AuNR溶液；2将400～600mgCTAB与10～20mgAuNR溶液、1～3mL无水乙醇、0.5～1mL氨水和10～20μLBTEE混合，并在20～50℃下搅拌2～10h得到SiO2@AuNR溶液；3将10～20mgSiO2@AuNR与60～90uLAPTES在20～50℃下混合搅拌8～15h，离心洗去未反应APTES，接着向氨基化的SiO2@AuNR溶液中加入0.5～2mg羧基化Fe3O4，20～50℃下搅拌10～30h，得到Fe3O4-SiO2@AuNR溶液；4将1～3mL25％的戊二醛溶液缓慢滴加到10～20mgFe3O4-SiO2@AuNR溶液中，20～50℃下搅拌2～4h，接着向溶液中加入40～80mg脲酶，并在20～50℃搅拌10～12h，通过脲酶的固定得到只有一侧含有脲酶的Fe3O4脲酶-SiO2@AuNR；5将20～40μL浓度为5～20uMH1和40～70μL浓度为5～20μMH2加入到10～20mL浓度为1～2mgmL的Fe3O4脲酶-SiO2@AuNR水溶液中，20～50℃下避光搅拌8～12h，制备出脲酶驱动的JanusH2-Fe3O4脲酶-SiO2@AuNR-H1纳米探针。

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百度查询： 徐州医科大学 一种脲酶响应型膀胱癌miRNA检测纳米探针的制备方法及应用