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一种提高NK细胞杀伤活性的培养方法 

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申请/专利权人:清泽医疗科技(广东)有限公司

摘要:本发明属于免疫学领域,公开了一种提高NK细胞杀伤活性的培养方法。其包括如下步骤:(1)分离获得外周血单个核细胞,(2)用包被液对培养瓶进行包被,在含有大米低聚肽、二十二碳六烯酸、IL‑15和IL‑12的培养基进行诱导培养;(3)在含有DMEM培养基、吡嗪甲酰胺、灯盏花素、谷氨酰胺、IL‑2和IL‑21的培养基中扩增培养,得到NK细胞。本发明中大米低聚肽、二十二碳六烯酸能够协同作用,促进NK细胞的诱导分化,并且能够和扩增培养基中的吡嗪甲酰胺、灯盏花素之间相互配合作用,有效提高NK细胞的体外肿瘤杀伤活性,在肿瘤免疫治疗中具有重要作用。

主权项:1.一种提高NK细胞杀伤活性的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)分离获得外周血单个核细胞;(2)采用包被液对培养瓶进行包被,将包被后的培养瓶作为诱导培养瓶,取步骤(1)中外周血单个核细胞用诱导培养基重悬,接种于诱导培养瓶中诱导培养2-3d,得到细胞培养液;所述诱导培养基的成分为:AIM-V培养基、大米低聚肽3.5-10μgmL、二十二碳六烯酸1-5μgmL、IL-1580-100ngmL、IL-12200-300IUmL;(3)向步骤(2)的细胞培养液中加入扩增培养基继续培养8-10d,每2-3天补充一次扩增培养基,使细胞密度保持在1-3×106个mL,得到NK细胞;所述扩增培养基的组成为:DMEM培养基、吡嗪甲酰胺10-20ngmL、灯盏花素1-5μgmL、谷氨酰胺5-15μgmL、IL-2800-1000IUmL、IL-2190-120IUmL。

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