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申请/专利权人：南京林业大学
摘要：本发明公开了一种发根农杆菌介导的杂交鹅掌楸转基因方法，属于遗传转化技术领域。本发明的发根农杆菌介导的杂交鹅掌楸转基因方法，将杂交鹅掌楸顶芽接种于发根农杆菌平板菌中，共培养并且筛选得到根部转化的嵌合体杂交鹅掌楸转基因植株。本发明构建的转基因植株根系的根尖处具有较强绿色荧光，而未转化根尖无绿色荧光；诱导获得的杂交鹅掌楸荧光毛状根中，rolB、NeoR、TIP和SBP基因均能扩增出条带，表明这些荧光毛状根均为发根农杆菌诱导的转基因毛状根，使用该体系将目的基因转入杂交鹅掌楸根系中是快速可行的。
主权项：1.一种发根农杆菌介导的杂交鹅掌楸转基因方法，其特征在于，包括：通过冻融法将带有35S::GFP报告基因的pRI101质粒转入发根农杆菌中，挑取验证阳性的单克隆至含有50mgL硫酸卡那霉素和25mgL硫酸链霉素的LB液体培养基中，28℃、200rpm震荡培养16-24h，取摇好的菌液与50%的甘油等体积混匀，制得发根农杆菌甘油菌；将发根农杆菌甘油菌在含有50mgL硫酸卡那霉素和25mgL硫酸链霉素的LB固体培养基上进行划平板，28℃倒置培养48h，制得发根农杆菌平板菌；将杂交鹅掌楸顶芽接种于发根农杆菌平板菌上，共培养并且筛选得到根部转化的嵌合体杂交鹅掌楸转基因植株；所述的发根农杆菌为K599；所述共培养条件为将接种发根农杆菌平板菌的杂交鹅掌楸顶芽置于共培养培养基中培养48h；所述共培养培养基配方为：12MS+100μMLAS+6.8gL琼脂，pH5.73～5.74；所述筛选条件为将共培养后的杂交鹅掌楸顶芽转移到筛选培养基中筛选培养30d；所述筛选培养基配方为：12MSMS+0.05～0.2mgLNAA+0.1～0.2mgLIBA+200mgL特美汀+6.8gL琼脂，pH5.73～5.74。
全文数据：
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百度查询： 南京林业大学 一种发根农杆菌介导的杂交鹅掌楸转基因方法
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