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申请/专利权人：大连博格林生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种血浆外泌体提取试剂，具体的公开了一种血浆外泌体提取试剂、富集方法、提取试剂盒及其应用。本发明公开的技术方案与传统的超高速离心相比，样本中的外泌体所受到的压力较小，可以保持较完整的形态；本方案在传统非离子聚合物PEG的基础上添加了多聚赖氨酸一种带正电荷的氨基酸聚合物、poly‑lysinePEGConjμgate、以及硫化物TCEP或者DTT，使得提取过程所需要的时间更短、所需要的样本起始量更低、提取效率更高，提取成本低。通过本方案获得的血浆外泌体可适用于多种下游实验，如RNA分析、高通量测序、细胞共培养等。

主权项：1.一种血浆外泌体提取试剂在提取小鼠血浆外泌体中的应用，其特征在于，所述提取试剂由以下质量百分含量成分组成：PEG800025%、多聚赖氨酸10%、磷酸盐缓冲体系65%、TCEP0.001mgmL；所述多聚赖氨酸分子量范围为30000-70000道尔顿之间；所述应用包括以下步骤：1）制备血浆11）在采血管中预先加入抗凝剂，采集完血液后，将采血管缓慢颠倒混匀，混匀的全血室温静置1h或者2-8℃静置过夜；12）4℃，3000g离心5-10分钟，上层的透明黄色液体即为血浆，小心转移上清至新的离心管中，注意切勿吸出下面的红细胞成分；13）收集到的血浆可直接用于后续提取外泌体实验或分装后于-80℃冰箱保存；2）准备样品1）将血浆冰上放置；2）4℃，2000g离心20分钟，去除残留细胞及碎片；3）将上清转移到新的离心管中；4）4℃，10000g离心20分钟，去除残留碎片；5）将上清转移到新的离心管中，注意不要吸到底部的沉淀，冰上放置直至使用；3）提取外泌体：不使用蛋白酶K处理31）吸取适量离心后的血浆到新的离心管，加入0.5倍体积的1xPBS；32）涡旋充分混匀；33）加入0.2倍体积的提取试剂；34）上下颠倒混匀或者通过移液器吹打混匀，直至成为均一的溶液；35）室温下，孵育10分钟；36）孵育后，4℃，10000g离心5分钟；37）用移液器小心吸去上清液，尽量吸取干净，管底的沉淀即为提取的外泌体；38）10000xg离心30s，沉降残留的提取试剂；39）小心吸取并丢弃上清液体，然后按照“重悬外泌体”步骤进行操作；4）重悬外泌体41）使用1xPBS缓冲溶液，通过移液器将沉淀充分吹打混匀；42）将分离得到的外泌体保存在2℃至8℃，保存1周；或≤-20℃长期保存。

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