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申请/专利权人:亦诺兴创(北京)生物科技有限公司
摘要:本发明属于生物检测技术领域,提供了一种磁珠‑流式细胞仪检测间充质干细胞培养上清及浓缩液中外泌体的方法,包括链霉亲和素包被磁珠,抗CD9抗体、抗CD63抗体和抗CD81抗体的生物素化标记,链霉亲和素包被的磁珠与生物素化标记的抗CD9抗体、抗CD63抗体和抗CD81抗体偶联,外泌体样本中外泌体捕获,荧光素偶联的CD63检测抗体孵育,使用能够检测小于300nm粒径的流式细胞仪上机检测,以及利用流式细胞仪分析软件对数据进行分析得到外泌体的定量检测结果等步骤。本发明方法可有效地对间充质干细胞培养上清及浓缩液中的外泌体进行定量分析,结果特异性强,且操作过程方便、快捷、重复性好。
主权项:1.一种磁珠-流式细胞仪定量检测外泌体的方法,其包括如下步骤:1将磁珠用链霉亲和素包被;2将抗CD9抗体、抗CD63抗体和抗CD81抗体分别进行生物素化标记;3将链霉亲和素包被的磁珠与生物素化标记的抗CD9抗体、抗CD63抗体和抗CD81抗体进行偶联,得到生物素化抗体-磁珠偶联物;4将3中得到的偶联物加入到外泌体样本中进行外泌体捕获;5加入使用荧光素偶联的CD63检测抗体进行孵育,得到CD63荧光抗体标记的外泌体检测液;6将5中的外泌体检测液使用能够检测小于300nm粒径的流式细胞仪上机检测;7利用流式细胞仪分析软件对数据进行分析,得到外泌体的定量检测结果。
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