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申请/专利权人：四川大学华西医院;济南市儿童医院(山东大学附属儿童医院)

摘要：本发明涉及生物医疗领域，具体涉及卡波西样血管内皮瘤细胞及动物模型的构建方法及应用。通过新鲜的猪主动脉得到DAM溶液。在无菌条件下，用手术剪将血管瘤样本切碎，利用血管特异性DAM包被组织碎片，采用内皮细胞培养基培养。14天后利用胰酶消化分解孵育出的细胞，获得原代KHE细胞。使用流式细胞仪从原代培养物中无菌分选CD31+细胞CD31+KHEcell，在37℃含5％CO2的湿化环境中，对CD31+KHEcell进行培养。将原代CD31+KHEcell悬浮于血管特异性DAM中，然后注射到6周龄雄性裸鼠的右大腿区域皮下，每只细胞数量为1×107。在注射后的第10天，对这些动物实施安乐死，并采集其皮下移植瘤，随后固定在10％中性缓冲福尔马林中，用于后续免疫荧光。

主权项：1.卡波西样血管内皮瘤细胞模型的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：S1、将新鲜的猪主动脉浸泡在含有100Uml青霉素和100gml链霉素的磷酸盐缓冲盐水中，置于冰上立即转入实验室；S2、首先用蒸馏水在轨道振动筛上冲洗24h，裂解血细胞；S3、浸入0.5％的TritonX-100溶液中，持续振荡24h；S4、用磷酸盐缓冲盐水洗涤2h后，将动脉浸入0.25％SDS溶液中，连续振荡72h；S5、脱细胞动脉用磷酸盐缓冲盐水振荡72h；S6、将获得的脱细胞血管保存在-20℃下以备进一步使用；S7、将冻干的DAM磨成粉末，用10％的胃蛋白酶及0.01MHCl在室温下搅拌48h。然后加入0.1MNaOH将DAM溶液中和到pH为7.2～7.4；S8、用磷酸盐缓冲盐水将DAM溶液调整最终浓度为10mgmLS9、用手术剪将卡波西样血管内皮瘤样本切碎，使用DAM溶液包被组织碎片，采用内皮细胞培养基进行培养；S10、培养14天后利用胰酶消化分解孵育出的细胞，获得原代KHE细胞；S11、使用流式细胞仪从原代培养物中无菌分选CD31+KHEcell，并对CD31+KHEcell进行培养。

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