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申请/专利权人：承德市农林科学院

摘要：本发明提供了一种基于工农业废弃物的土壤改良剂及其制备方法，包括如下步骤：步骤1，植物促生菌筛选，将获得的固氮菌落点接至有机磷固体培养基和无机磷固体培养基上，置于25℃恒温培养3d，观察各菌株在磷固体培养基上的生长状态及产生透明圈情况，将能够在磷固体培养基上产生透明圈的菌株继续转接至相应的磷固体培养基上。本发明通过将农林废弃物与工业固体废弃物相结合，制备栽培基质和土壤改良剂，一方面可以丰富农林废弃物中营养物质的含量，另一方面还可以弥补工业废弃物中营养元素单一的缺点，通过添加具有固氮溶磷功能的植物促生菌，更好地释放了废弃物中的营养物质和矿质元素，为植物生长提供全面的营养。

主权项：1.一种基于工农业废弃物的土壤改良剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、植物促生菌筛选，样品采集及处理，采集自然发酵腐熟物、林下腐殖质，于密封袋中保存，低温送至实验室备用；称取10g样品装入90mL无菌水中，于恒温振荡培养箱中充分振荡混匀20min后，取菌悬液进行梯度稀释，稀释浓度为10-4、10-5、10-6，吸取100μL菌悬液涂布于LB固体培养基上，每个梯度重复三次，置于25℃恒温培养箱中培养3d，挑取不同形态的单菌落进行划线培养，纯化三次以上直至获得纯菌，并进行标号，保存菌种，将获得的单菌落点接在无氮固体培养基置于25℃恒温培养箱中培养3d，观察各菌株生长情况，将能够在无氮培养基上生长的菌株继续转接至无氮固体培养基上，连续转接三次以上，筛选出能够在无氮培养基上稳定生长的菌株，获得固氮菌；促生菌筛选，将获得的固氮菌落点接至有机磷固体培养基和无机磷固体培养基上，置于25℃恒温培养3d，观察各菌株在磷固体培养基上的生长状态及产生透明圈情况，将能够在磷固体培养基上产生透明圈的菌株继续转接至相应的磷固体培养基上，连续转接三次以上，筛选出能够在磷固体培养基上稳定生长且能够产生明显透明圈的菌株，获得溶磷菌；步骤2、对筛选获得的固氮溶磷菌进行液体发酵培养，取培养完的发酵液进行植物激素的测定，确定促生菌株的促生活性；步骤3、促生菌促生效果测定，确定各菌株的促生效果；步骤4、促生菌耐受性测试，挑取获得的促生菌单菌落于LB液体培养基中活化培养18h后，按1%接种量转接至新的LB液体培养基中，振荡培养18h后获得各菌株发酵种子液；制备不同浓度梯度的粉煤灰LB液体培养基，其中，粉煤灰LB液体培养基的浓度梯度分别为0、10％、20％、30％、40％，高压灭菌冷却后，按1%接种量接种上述发酵种子液，以接种等量无菌水为空白对照，于25℃恒温振荡培养箱中培养48h；培养完成后，取各浓度梯度菌悬液100μL涂布于固体培养基上，每个浓度设置三个平行，25℃倒置培养48h，观察各个固体培养基上菌落生长情况；另外将培养液静置3min，取各浓度梯度培养液上清部分，以接种等量无菌水的空白组做对照，在600nm下测定各处理组OD值，记录各梯度菌株生长情况；步骤5、促生菌剂制备，将筛选获得的具有固氮和溶磷功能的促生菌株，培养后制备促生菌剂；挑取促生菌单菌落接种至LB液体培养基中，25℃振荡培养20h，按1%接种量转接至新的LB液体培养基中，振荡培养18h后，取发酵液于600nm下测定各菌液OD值，使OD值在0.6-0.8之间；用无菌水或缓冲液调整各菌液浓度至108CUFmL，即为促生菌剂，于4℃冷藏保存，备用；步骤6、固体废弃物复配，以发酵后的食用菌废菌渣、粉煤灰、蛭石为原料，按不同比例进行混合，混合比例为：①粉煤灰：食用菌废菌渣：蛭石＝2:3:3；②粉煤灰：食用菌废菌渣：蛭石＝3:3:1；③粉煤灰：食用菌废菌渣：蛭石＝4:3:2；加入木醋液调整混合基质pH值至弱酸性或中性，搅拌均匀，静置3-4h，使混合基质与木醋液充分混合，备用；按1%接种量将上述步骤5中获得的促生菌剂加入混合基质中，搅拌均匀，静置3-4h使混合基质充分吸附促生菌剂，得到土壤改良剂。

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