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申请/专利权人:天津科技大学
摘要:本发明属于酶工程技术领域,具体涉及一种乳糖酶及其应用。本发明以两种来源的乳糖酶来源于环状芽胞杆菌B2301的BglD305和来源于环状芽胞杆菌ATCC31382的BglD分子为基础进行分子进化,获得合成低聚半乳糖效率高、表达性能好的乳糖酶新酶分子;并构建乳糖酶高产菌株,能够在深层发酵时高效合成乳糖酶并将酶蛋白分子分泌到培养基中,从发酵上清中直接制备高活性的酶制剂,乳糖酶的表达水平可以达到2208UmL,有助于降低乳糖酶的发酵制造成本、简化发酵制造工艺并提高乳糖酶酶制剂的质量。
主权项:1.一种含有乳糖酶编码基因的重组菌株,其特征在于,所述重组菌株采用的表达宿主为地衣芽胞杆菌突变株BCBT0529,突变株BCBT0529是在编号为CCTCCNO.M208236的地衣芽胞杆菌CBB3008的基因组上敲除aprE,vpr,wpr,lacR,lacA,lacA2,yesZ基因所得; aprE,vpr,wpr,lacR,lacA,lacA2,yesZ基因的GenBank登录号分别为:MT885340、MT885341、MT885342、MT885336、MT885337、MT885338、MT885339;所述乳糖酶的氨基酸序列如序列表SEQIDNO.12所示:MSKTTSAAGNSVSYDGERRVNFNENWRFQRETNGSIAGAQNPGFDDSSWRKLNLPHDWSIELDFNKNSLATHEGGYLDGGIGWYRKTFTIPESMKGKRISLDFDGVYMNSTTYLNGEVLGTYPFGYNAFSYDISDKLYKDGRANVLVVKVNNTQPSSRWYSGSGIYRNVYLTVTDPIHVARYGTFVTTPNLEKSIKEDRADVNIKTKISNDAAEAKQVKIKSTIYDGAGNTVQTVETEEKTAAAGTVTPFEQNTVIKQPKLWSIDKPYRYNLVTEVIVGGQTVDTYETKFGVRYFKFDENEGFSLNGEYMKLHGVSMHHDLGALGAATNARGVERQMQIMKDMGVNAIRVTHNPASPELLEAANKLGLFIIEEAFDSWAQSKKPYDYGRFFNAWAEHDIKEMVDRGKNEPAIIMWSIGNEIYDTTNAAGVETARNLVGWVKEIDTTRPTTIGEDKTRGDKVNVTPINSYIKEIFNIVDVVGLNYSENNYDGYHKQNPSWKLYGSETSSATRSRGVYTHPYQYNQSTKYADLQQSSYDNDYVGWGRTAEDAWKYDRDLKHIAGQFIWTGFDYIGEPTPYYNSYPAKSSYFGAVDTAGFPKDIFYYYQSQWKKEPMVHLLPHWNWKEGEKVRVLAYTNASKVELVLNGESLGEKNYDNKQTSWGAPYKETKDGKTYLEWAVPFKPGKLEAVAKDENGKVIARDQVVTAGEPASVRLTADRKVVKADGTDLSFITADIVDSKGIVVPDADHLITFNVTGQGELAGVDNGNASSVERYKDNKRKAFSGKALAIVQSSKLSGKITVHASVAGLSSDSTSVFTVTP;所述乳糖酶编码基因如序列表SEQIDNO.11所示。
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