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申请/专利权人:北京利和制药有限公司
摘要:本发明公开了一种洋葱来源外泌体的提取纯化方法及制备的外泌体和应用。首先,洋葱经研磨破碎后,加入含纤维素酶与果胶酶的缓冲液进行酶解,形成混合物。随后,通过高速离心与深层过滤,分离出提取滤液。利用不同孔径的超滤膜技术,初步提取洋葱外泌体粗品。最后,采用离子交换层析法深度纯化,去除杂质,获取高纯度洋葱外泌体,并进行抗炎修复效能测试。本方法融合酶解、超滤与离子交换技术,高效、高纯度提取并纯化洋葱外泌体,省去了凝胶层析步骤,解决了其体积大、处理量小的问题,且产物具备优异的抗炎修复效果。
主权项:1.一种洋葱来源外泌体的提取纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:S1.对洋葱进行处理,切碎后进行研磨,加入缓冲液进行冲洗和悬浮混合,形成混浊液,加入纤维素酶和果胶酶进行混合,在低温下进行晃动混匀处理;S2.过滤去除大颗粒的固体沉淀物,得上清液,对过滤沉淀物再一次清洗,弃沉淀,留上清液,两次上清液合并;S3.将步骤S2得到的上清液进行离心处理,弃沉淀,留上清液;S4.将步骤S3得到的上清液进行两次过滤,第一次进行深层过滤,第二次采用小孔径滤器进行过滤;S5.将步骤S4得到的上清液进行超滤浓缩后洗滤,得到超滤浓缩洗滤后的外泌体粗提取溶液;S6.将步骤S5得到的外泌体粗提取溶液进行离子交换层析,得到纯化的洋葱外泌体。
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