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申请/专利权人:成都医学院;西南交通大学
摘要:本发明公开了一种体外验证中药复方抗包膜病毒作用的方法及应用,属于生物医药技术领域,解决了中药复方的抗病毒作用机制尚不清楚的问题,包括质粒构建,假病毒的构建,中药复方配置,通过CCK‑8法检测中药复方的细胞毒性,确定安全作用时间和浓度;通过感染抑制实验,将假病毒和复方中药分别共培养,荧光显微镜观察绿色荧光细胞的数量确定复方中药对病毒感染活性的影响;通过网络药理学分析与分子对接虚拟分析方法,探索中药复方抗包膜病毒的机制。本发明通过构建新型冠状病毒假病毒的方式,将生信分析方法与体外实验验证方法相结合,系统性地探索中药复方对新型冠状病毒的抑制作用及机制。
主权项:1.一种体外验证中药复方抗包膜病毒作用的方法,其特征在于,具体包括下述步骤:S1、质粒构建:采用同源重组方法,在受体细胞中构建CMV-Fluc-EGFP质粒;S2、假病毒的构建:利用三质粒系统,构建Fluc-EGFP双报告基因的假病毒,通过感染实验验证假病毒的感染能力和滴度测定;S3、中药复方配置:将中药复方使用二甲基亚砜溶解后进行稀释,将药剂配置成不同的浓度梯度备用;S4、通过CCK-8法检测中药复方的细胞毒性,确定安全作用时间和浓度;通过感染抑制实验,将假病毒和复方中药分别共培养,荧光显微镜观察绿色荧光细胞的数量确定复方中药对病毒感染活性的影响;S5、通过网络药理学分析与分子对接虚拟分析方法,探索中药复方抗包膜病毒的机制,包括探究复方作用于细胞及新型冠状病毒的关键通路和核心靶蛋白,并分析复方中活性成分的潜在靶向作用;S6、采用荧光定量PCR法,验证中药复方抗包膜病毒的多靶点调节作用,并验证中药复方对STAT3ACE2的靶向调节作用。
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百度查询: 成都医学院 西南交通大学 一种体外验证中药复方抗包膜病毒作用的方法及应用
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