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申请/专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所;广西八桂种苗高科技集团股份有限公司
摘要：本发明公开了一种发根农杆菌介导的尾巨桉遗传转化方法及其应用。本发明尾巨桉优良无性系DH32‑29为外植体材料，通过筛选外植体的选择、农杆菌菌株类型、菌液浓度、浸染时间以及处理方式等重要因素进一步优化了转化体系，建立了高效稳定的发根农杆菌介导的尾巨桉遗传转化体系，成功地获得了再生植株，为今后开展桉树特定基因功能的鉴定和桉树的遗传改良奠定基础。
主权项：1.一种发根农杆菌介导的尾巨桉遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.取在增殖培养基中培养20-25d的增殖苗叶片作为外植体，将表面划有1-2道伤口的增殖苗叶片外植体置于OD600＝0.3的MSU440发根农杆菌悬浮液中浸染30min；所述的浸染为浸泡结合超声波辅助处理5s，浸泡期间每隔5min震荡一次；S2.浸染结束后，用无菌滤纸吸干外植体表面的悬浮液，随后置于共培养培养基上并在黑暗条件下共培养3d；所述的共培养培养基的组成如下：20.0gL蔗糖、6.0gL琼脂粉、50μMAS，余量为WPM；S3.将共培养结束后的外植体转入毛状根诱导培养基培养2-4个星期，获得毛状根；所述的毛状根诱导培养基的组成如下：20.0gL蔗糖、2.5mgLPVP、2.0gLPVPP、0.8gL水解酪蛋白、200mgLCef、6.0gL琼脂粉，余量为WPM；S4.将毛状根切成小段，接种至芽诱导培养基中培养至长出绿色小芽点后，再将绿色小芽点转入增殖培养基进行不定芽伸长培养；所述的芽诱导培养基的组成如下：0.2mgLTDZ、0.2-0.5mgLIBA、20.0gL蔗糖、6.0gL琼脂粉，余量为WPM；S5.待绿色小芽点长至2-3cm，转入生根培养基进行生根培养，获得生根苗。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国林业科学研究院热带林业研究所 广西八桂种苗高科技集团股份有限公司 一种发根农杆菌介导的尾巨桉遗传转化方法及其应用
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