恭喜上海实验动物研究中心沈如凌获国家专利权
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龙图腾网恭喜上海实验动物研究中心申请的专利一种可诱导辅助性T细胞17剔除小鼠模型及其构建方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117947095B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-11发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311843578.9,技术领域涉及:C12N15/85;该发明授权一种可诱导辅助性T细胞17剔除小鼠模型及其构建方法是由沈如凌;郭洋;范春;朱梦妍;喻智澜;王成稷设计研发完成,并于2023-12-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种可诱导辅助性T细胞17剔除小鼠模型及其构建方法在说明书摘要公布了:本发明属于生物技术领域,具体涉及一种可诱导辅助型T细胞17剔除小鼠模型的构建方法及其剔除效果的验证。该方法利用Rorc分子是促进Th17细胞正常分化的关键分子这一特性,通过将白喉毒素受体和红色荧光蛋白tdTomato定点插入Rorc分子基因表达框,构建了Rorc‑T2A‑tdTomato‑P2A‑DTR简称:Rorc‑DTR基因修饰小鼠模型,该模型可以实现小鼠内源Rorc基因驱动红色荧光蛋白和白喉毒素受体表达。利用该模型,发明人可以通过tdTomato荧光标记示踪小鼠Th17细胞,可以通过在特定时间点或时间段内给予小鼠白喉毒素将Th17细胞杀死,造成Th17细胞缺陷,对Th17细胞在特定生理、病理过程重的作用进行研究。
本发明授权一种可诱导辅助性T细胞17剔除小鼠模型及其构建方法在权利要求书中公布了:1.一种可诱导辅助性T细胞17剔除小鼠模型的构建方法,其特征在于,将白喉毒素受体表达片段构建入维甲酸相关孤核受体基因中进行表达,实现在T细胞中表达白喉毒素受体;所述构建方法具体包括以下步骤:a.gRNA靶位点筛选:筛选得到低脱靶风险的gRNA靶位点,所述gRNA靶位点的序列信息如SEQIDNO:1所示;b.同源重组载体构建,确定gRNA位点及插入位点信息,构建同源重组载体;Ⅰ.构建基因敲入片段:通过基因合成T2A肽、红色荧光蛋白、P2A肽和白喉毒素受体,其序列信息依次如SEQIDNO:3-5所示,并按照从左到右依次连接构建得到基因敲入片段;Ⅱ.构建重组左臂和重组右臂:以小鼠基因组为模板,通过PCR扩增得到重组左臂的序列如SEQIDNO:2所示,重组右臂的序列如SEQIDNO:7所示;Ⅲ.构建PBR322-Rorc-DTR重组载体:将重组左臂、基因敲入片段和重组右臂连入PBR322载体,获得PBR322-Rorc-DTR重组载体;c.Rorc-DTR基因敲入小鼠构建:取成熟小鼠的受精卵,将PBR322-Rorc-DTR重组载体、Cas9mRNA和gRNA混合后,受精卵显微注射,注射后的受精卵经培养箱短暂培养后,移植至受体母鼠的输卵管,获得基因修饰小鼠F0代小鼠;选取构建成功F0代小鼠与野生型小鼠交配,获得F1代小鼠,鉴定得到重组阳性小鼠。
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