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申请/专利权人：中国水产科学研究院珠江水产研究所;佛山市高明区万绿源生态种养殖有限公司
摘要：本发明公开了一种利用外周血细胞制备鼋染色体标本的方法，属于细胞遗传学领域。本发明通过采集鼋外周血，经过血细胞培养、秋水仙素处理、染色制片等步骤，制备得到了便于观察、图像清晰的鼋染色体中期分裂相标本。本发明克服了目前水生动物染色体标本制作方法中存在的对动物伤害大的问题，实现了无损伤取样，仅需采集样本的少量外周血，对动物的生存状态影响较小。本发明制片方法简单快速，采血后72h即可得到鼋染色体的中期分裂相，便于观察，为进一步开展鼋基因组及进化相关研究，实现鼋更充分的保护提供了有利的工具。
主权项：1.一种鼋染色体标本的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1外周血取样：使用负压采血管和灭菌针头，从活体鼋的颈部血窦中采集外周血1mL；血液采集后，置于4℃条件下暂存；2外周血细胞培养：在无菌条件下进行细胞培养操作；在CO2浓度为5％、28℃条件下培养72h；3秋水仙素处理：培养完成的血细胞，加入终浓度为100～150ngmL的秋水仙素处理3～4小时；4染色体制片：秋水仙素处理后，低渗50min；低渗后，用1500rmin的转速收集细胞，使用卡诺固定液固定1～2次，后采用冷玻片干燥法进行制片；使用吉姆萨染液染色20min；所述负压采血管中含有肝素钠；步骤2中使用改良的市售Eagle基础培养基，培养基改良配方为在基础培养基上加入：20mM4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1mM谷氨酸盐，2nM亚硒酸钠，1mM非必须氨基酸，1mM丙酮酸钠，1mM青霉素和链霉素双抗，55μMβ-巯基乙醇，15％胎牛血清，5ngmL重组人碱性成纤维细胞生长因子；每3mL培养基加200μL全血，另外加入750μg植物血球凝集素。
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