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申请/专利权人：宁夏大学
摘要：本发明涉及一种基因缺失株的应用及其构建方法，具体地说，涉及布鲁氏菌A19bvfA基因缺失株及其构建和应用。本发明对bvfA基因在布鲁氏菌中的功能进行了研究，成功构建布鲁氏菌A19bvfA基因缺失株，利用其制备的布鲁氏菌A19bvfA基因缺失株疫苗可区分自然感染和疫苗免疫。
主权项：1.布鲁氏菌A19bvfA基因缺失株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，利用引物Mpp-5F和Mpp-5R从布鲁氏菌A19基因组上扩增上游同源重组手臂，利用引物Mpp-3F和Mpp-3R扩增下游同源重组手臂，利用引物Mpp-KnF和Mpp-KnR从pKD4质粒上扩增卡那霉素抗性基因，利用引物Mpp-5F和Mpp-3R将Mpp基因上、下游同源重组手臂与卡那霉素抗性基因通过融合PCR技术连接，得到完整打靶片段ΔMpp::Kn；所述引物Mpp-5F、Mpp-5R、Mpp-3F、Mpp-3R、Mpp-KnF和Mpp-KnR的核苷酸序列如SEQIDNO.1-6所示；S2，将打靶片段ΔMpp::Kn克隆入自杀质粒pCVD442，获得打靶质粒pCVD442-ΔMpp::Kn；S3，将打靶质粒pCVD442-ΔMpp::Kn电转化进入大肠杆菌β2155菌株，培养至单克隆形成，即得到供体菌株β2155pCVD442-ΔMpp::Kn；S4，将供体菌株β2155pCVD442-ΔMpp::Kn与受体菌布鲁氏菌A19进行接合，将接合后的菌液培养至单克隆形成，得到目的菌株A19ΔMpp::Kn，即布鲁氏菌A19bvfA基因缺失株。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 宁夏大学 布鲁氏菌A19 bvfA基因缺失株及其构建和应用
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