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申请/专利权人：江苏省淡水水产研究所
摘要：本发明涉及一种海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢的特异性分子鉴别方法，步骤包括：1分别提取海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢基因组DNA；2PCR扩增海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢的线粒体控制区，得到目的片段的PCR产物；3扩增产物纯化后，直接测序，海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢扩增产物序列比对，序列的第253‑258位点碱基为GGGGGG的是海丰沙塘鳢，序列的第253‑258位点碱基为CCCCCC的则是河川沙塘鳢。本发明能够快速、简便、准确、有效地鉴别海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢，结果稳定性好，重复率高，这种鉴定方法将在水产养殖和资源调查中发挥重要作用。
主权项：1.一种海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢的特异性分子鉴别方法，其特征在于：包含以下步骤，1分别提取待鉴定的海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢基因组DNA；2以提取的基因组DNA为模板，PCR扩增海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢的线粒体控制区，得到目的片段的PCR产物；所述的PCR扩增海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢的线粒体控制区，其使用的上游引物如序列SEQIDNO.1所示，下游引物如序列SEQIDNO.2所示；所述的PCR反应体系为50μL：50ngμL的模板DNA1μL，PCR缓冲液5μL，dNTP混合液4μL，每种dNTP0.1mmolL，10μmolL的上、下游引物各1μL，2μL2IU的Taq酶；双蒸水36μL；所述的PCR缓冲液由10mmolLTris-HCl，pH9.0，0.5mmolLKCl，30mmolLMgCl2，0.01％明胶组成；PCR扩增反应程序为：94℃预变性2min，94℃变性45s，53℃退火1min，72℃延伸1min，经30个循环后再72℃延伸10min；3扩增产物纯化后，直接测序，进行海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢扩增产物序列比对，序列的第253-258位点碱基为GGGGGG的是海丰沙塘鳢，序列的第253-258位点碱基为CCCCCC的是河川沙塘鳢。
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百度查询： 江苏省淡水水产研究所 一种海丰沙塘鳢和河川沙塘鳢的特异性分子鉴别方法
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