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申请/专利权人：贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室(贵州医科大学天然产物化学重点实验室)
摘要：本发明原矛头蝮蛇毒C型蛋白的制备方法及其作为诊断试剂的应用，通过三步层析从国产原矛头蝮蛇毒中分离纯化得到新颖的目标蛋白Protocetin，其具有诱导血小板发生聚集的功能。基于Protocetin能通过作用vWF进而通过GPIb激活血小板导致血小板聚集，使其可以用于检测vWF的功能及血小板的聚集功能，从而能在临床上用于检测血友病以及与GPIb结构与功能异常的血小板相关疾病。
主权项：1.原矛头蝮蛇毒C型蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、分子筛凝胶过滤层析；SephadexG-75凝胶层析柱2.6×100cm，用PBS磷酸盐缓冲生理盐水，含0.147molLNaCl的0.01mol·L-1Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液，pH7.4平衡，流速24ml·h-1；称取原矛头蝮蛇毒冻干粉0.5g，溶于3mlPBS，将溶解后的蛇毒溶液以2000rpm离心10min，取上清液上样于前述已用PBS平衡好的SephadexG-75凝胶柱。上样完毕后，以PBS进行洗脱，流速24ml·h-1，自动收集器收集洗脱液，4ml管，测定280nm吸光值，取标记的洗脱部分合并用于下一步分离纯化。步骤二、肝素亲和层析；取原矛头蝮蛇毒SephadexG-75层析活性峰，脱盐或稀释后，上样于肝素亲和层析柱，采用PB缓冲液0.01mol·L-1Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液，pH7.0平衡肝素亲和层析，用含NaCl的PB缓冲液进行梯度洗脱，流速为1ml·min-1，2ml管收集样品，测定280nm吸光值，收集活性峰；步骤三、阳离子交换层析；HiTrapSP阳离子交换预装柱采用PB0.01mol·L-1Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液，pH7.0为平衡，取肝素亲和层析获得的活性峰上样后，充分洗脱后，用含1molNaCl的PB缓冲液进行梯度洗脱，流速为1ml·min-1，收集活性峰，SDS-PAGE检测纯度，用BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白质定量后，放入-80℃超低温冰箱备用。
全文数据：
权利要求：
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