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新型重组痘苗病毒VV-IL-37的构建方法和应用 

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申请/专利权人:郑州大学第一附属医院

摘要:新型重组痘苗病毒VV‑IL‑37的构建方法和应用,涉及癌症治疗技术领域,包括如下步骤:步骤一重组质粒pEGFP‑IL‑37‑N1的构建:经过引物设计、扩增、酶切、琼脂糖凝胶电泳、胶回收、连接、转化、摇菌、质粒提取步骤得到pEGFP‑IL‑37‑N1质粒;步骤二重组痘苗病毒VV‑IL‑37VV‑IL‑37‑GFP的生成与包装,采用该方法构建的重组痘苗病毒VV‑IL‑37‑GFP具有强感染能力和优异的IL‑37基因表达能力,且该新型重组痘苗病毒VV‑IL‑37可用于在制备肝癌药物。

主权项:1.新型重组痘苗病毒VV-IL-37的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一重组质粒pEGFP-IL-37-N1的构建:经过引物设计、扩增、酶切、琼脂糖凝胶电泳、胶回收、连接、转化、摇菌、质粒提取步骤得到pEGFP-IL-37-N1质粒;步骤二重组痘苗病毒VV-IL-37VV-IL-37-GFP的生成与包装:2.1取处于对数生长期的293细胞,制备成细胞悬液,然后铺到细胞培养皿中,放入CO2恒温细胞培养箱中培养;2.2用无血清的DMEM细胞培养基配制野生型痘苗病毒工作液,随后,将病毒工作液加入293细胞中,并放于CO2细胞培养箱孵育,使病毒吸附细胞;2.3取1上述pEGFP-IL-37-N1质粒加到离心管中,再依次加入ECbuffer和Enhancerbuffer,轻轻混匀后,室温放置;2.4向离心管中加入Effectene转染液,用移液枪轻轻吹打混匀后,室温放置;2.5之后向离心管加入DMEM细胞培养基,轻轻混匀,即为质粒转染工作液;2.6取出293细胞,弃掉上清,用PBS轻轻清洗三次,随后,加入质粒转染工作液,再添加DMEM细胞培养基,混匀后,放入CO2细胞培养箱中培养;2.7之后收集细胞上清液,放于离心机中离心1;离心完成后,用滤器过滤细胞上清液,随后,2.8将细胞上清液移入超速离心管中,并置于超速离心机中离心;离心完成后,弃掉上清,加入病毒保存液,充分溶解,即为生成并包装好的重组痘苗病毒VV-IL-37VV-IL-37-GFP。

全文数据:

权利要求:

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