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申请/专利权人：聊城大学

摘要：本发明属于生物检测和分子生物学技术领域，具体涉及一种DTNS介导的检测8‑OGDNA糖基化酶活性的方法。在8‑OGDNA糖基化酶的作用下，DTNS的结构由开放态变为闭合态，使Cy3供体和Cy5受体之间的距离靠近，从而引发高效的FRET。利用本方法，不仅能够实现灵敏和选择性地检测细胞外的8‑OGDNA糖基化酶活性，基于FRET信号输出模式，还能预防核酸酶降解产生的假阳性信号，有利于活细胞内的准确成像。

主权项：1.一种DNA四面体纳米开关，其特征在于：包括：DNA四面体，DNA四面体的一个顶点上连接有双链DNA探针；所述双链DNA探针由含8-OG的识别链和标记有供体受体双荧光团的报道链杂交而成；所述供体受体双荧光团为Cy3和Cy5；所述的DNA四面体的制备方法，包括：1制备DNA四面体：将四条DNA链进行等摩尔量混合，并在95℃下加热5min，然后快速转移至冰水浴中冷却30min，接着在4℃下放置1h；2制备双链DNA探针R-H：将识别链R和报道链H进行等摩尔量混合，并在25℃下孵育1h；3制备DTNS：将上述制备的DNA四面体和双链DNA探针R-H进行等摩尔量混合，并在25℃下孵育1h；所述制备DNA四面体、双链DNA探针R-H、DTNS的过程，均在1×PBS缓冲溶液pH7.4中进行；所述识别链R为：AATCAACTOGGAGAATOTAACTGASEQIDNO.5；所述报道链H为：AGATTGAGGGTTTGGGTGATTTTCAGTTACATCy5-TCTCCCAGTTGATTCCATGTGTAGAAATCAACTGGGAGAA-Cy3SEQIDNO.7；其中，SEQIDNO.5中的符号“O”为损伤碱基“8-OG”；所述四条DNA链，具体为：A链核苷酸序列为：ATCACCCAAACCCTCAATCTTTTACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTASEQIDNO.1；B链核苷酸序列为：TCAGCCAAGCATACTAACTATTTTATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAGATGCGAGGGTCCAATACSEQIDNO.2；C链核苷酸序列为：TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATCTACTATGGCGGCTCTTCSEQIDNO.3；D链核苷酸序列为：TTCAGACTTAGGAATGTGCTTCCCACGTAGTGTCGTTTGTATTGGACCCTCGCATSEQIDNO.4。

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