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申请/专利权人：中国水产科学研究院黄海水产研究所
摘要：本发明涉及一种制备半滑舌鳎精巢单细胞悬液的方法，属于细胞生物学领域，所述方法为取半滑舌鳎精巢组织，并用DMEM‑Nacl溶液冲洗组织，然后切碎匀浆；将酶混合溶液加入组织匀浆中，30℃水浴酶解消化5‑10min,显微镜下观察直至组织块基本消失；将消化后的细胞悬液用40μm细胞筛过滤；对滤过液进行第一次离心,收集细胞沉淀物，再加入PBS‑Nacl溶液重悬细胞，第二次离心，重复两次；将体积比0.1％BSA‑PBS‑Nacl溶液加入洗涤后的细胞沉淀中，重新悬浮细胞，即获得半滑舌鳎精巢单细胞悬液。本发明方法获得半滑舌鳎精巢单细胞悬液，并保证解离的细胞浓度为1000‑2000个μL，活率大于80％。
主权项：1.一种制备半滑舌鳎精巢单细胞悬液的方法，其特征在于所述方法的具体步骤如下：步骤一，取半滑舌鳎精巢组织，用含有0.03gml的Nacl的DMEM-Nacl溶液冲洗组织，将组织切碎、匀浆；步骤二，将酶混合溶液加入步骤一的组织匀浆中，30℃水浴酶解消化5-10min,显微镜下观察直至组织块基本消失；混合酶溶液为所述DMEM-Nacl溶液中含有终浓度质量体积比为0.05％的胰蛋白酶和终浓度质量体积比0.1mgml的胶原酶Ⅳ；步骤三，将消化后的细胞悬液用40μm细胞筛过滤；步骤四，将步骤三获得的滤过液第一次离心,离心条件为4℃下200-300×g，离心3-5min，收集细胞沉淀物，再加入含有0.03gml的Nacl的PBS-Nacl溶液重悬细胞，第二次离心，第二次离心条件为4℃下400-500×g，离心3-5min，重复两次；步骤五，将体积比0.1％BSA-PBS-Nacl溶液加入洗涤后的细胞沉淀中，重新悬浮细胞，即获得半滑舌鳎精巢单细胞悬液。
全文数据：
权利要求：
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