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申请/专利权人：上海乐合生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种高特异性和高灵敏性SPR芯片的制备方法。它包括以下步骤：1制备特异性适体修饰的金纳米颗粒；2制备抗体功能化修饰的磁纳米颗粒；3制备适体修饰的SPR芯片。本发明使用灵敏的SPR技术检测极微量的目标物BNP，该方法利用抗体功能化修饰的磁纳米颗粒结合BNP，高特异适体修饰的金纳米颗粒进行高特异性筛选，起到双重选择的效果，同时通过级联缀合能形成大的复合物，从而连接在SPR芯片上，导致SPR角度的显著增大，能检测低至pg级的微量BNP；本发明同时结合特异性抗体和适体，改善了传统的抗原抗体法所出现的假阳性问题，检测时间短，操作方便。

主权项：1.一种检测BNP的SPR芯片的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：1制备特异性适体修饰的金纳米颗粒：将BNP适体修饰在金纳米颗粒上，具体包括：a.选取粒径为20nm左右的金纳米颗粒；b.将质量浓度为0.05％的氯金酸溶液加入到装有回流冷凝装置的圆底烧瓶中，加热并快速搅拌，当氯金酸溶液沸腾20～30分钟后，一次性快速加入约3.5mL质量浓度为5％的柠檬酸三钠溶液，再持续加热150分钟，当溶液颜色逐渐变为酒红色之后，使其冷却至室温，用高速离心机对上述反应物进行离心，转速10000rpm，时间20～30min，除去上清液，然后加入等体积的磷酸缓冲盐溶液PBS进行复溶，得到BNP适体溶液，于4℃储存备用；c.向990μL金纳米颗粒中加入10μLBNP适体溶液修饰，得到金纳米颗粒的修饰溶液，取上述金纳米颗粒溶液,用高速离心机进行离心，转速10000rpm，时间10～20min，除去上清液，然后加入等体积的磷酸缓冲盐溶液PBS进行复溶，即可得到特异性适体修饰的金纳米颗粒；2制备抗体功能化修饰的磁纳米颗粒：将BNP抗体修饰在磁纳米颗粒上，具体包括：a.在体积为1mL、浓度为1mgmL的磁纳米颗粒溶液，加入体积为10ul、浓度为1mgml的BNP抗体；b.用磷酸缓冲盐溶液PBS洗三次后,磁纳米颗粒与特异性的BNP抗体的体积比控制为90～110:1，反应时间为20～30分钟；c.通过外部磁场对磁纳米颗粒进行磁分离，去除未结合的BNP抗体，弃上清液，磁纳米颗粒重悬于磷酸缓冲盐溶液PBS中，即得到抗体功能化的磁纳米颗粒；3制备适体修饰的SPR芯片：将BNP适体修饰在整个SPR芯片的金片上，具体包括：a.将SPR芯片的金片用水虎鱼洗液，浸泡30秒，之后用超纯水彻底清洗，氮气吹干备用；b.取100-200μL浓度为1μM的BNP适体溶液加到金片上，光反应30-50分钟，通过金-巯键将BNP适体的互补链修饰到SPR芯片表面，反应完成后，用超纯水清洗金片，氮气吹干，即得到适体修饰的SPR芯片。

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